Анализ на сифилис RPR– исследование, которое рекомендуется проводить в том случае, если необходимо поставить предварительный диагноз. Или оценить, насколько эффективной была терапия, что уже успели провести в больнице.

Аббревиатура расшифровывается, как rapid plasma reagin. Исследование относится к группе неспецифических. Поэтому лучше всего зарекомендовало себя в определении заражения бледной трепонемой в острый период развития недуга.

В каких случаях анализ отрицательный, а сифилис есть, хотят знать пациенты, и от чего зависят итоговые результаты исследования. Есть ли сходства и различия между RPR и РМП, и как расшифровывать результаты?
Rpr анализ крови что это

Как работает RPR тест на сифилис

Анализ крови на сифилис rpr, как отмечают доктора, работает очень просто.

Реакция основана на сочетании антигена и антитела.

Антиген – любой чужеродной для организма человека вещество, попавшее в него откуда-то извне. Тело человека закономерно считает такие антигены враждебными, начинает развертывать систему защиты от них.


Антитело – оружие иммунной системы в борьбе с антигенами, если говорить просто. Именно эти вещества организм вырабатывает в том случае, если в него попадают патогенные микроорганизмы, включая бледные трепонемы.

Выделяются два типа антител.

Первые могут реагировать на сразу несколько разновидностей антигенов. Получается, они обеспечивают защиту сразу от нескольких антигенов.

С другой стороны, есть очень узкоспециализированные антитела, которые вырабатываются только в ответ на контакт тела с определенными антигенами.

Суть исследования очень проста. У пациента берется кровь и смешивается с антигенами, которые принадлежат бледной трепонеме. Использоваться могут как искусственные антигены, так и натуральные. Если в кровеносной системе пациента есть антитела к возбудителю, то произойдет реакция с образованием осадка.

Если антитела отсутствуют, реакции не будет, а значит, в идеале, заболевания тоже нет.

Сходства между RPR и РМП методом

Часто пациенты интересуются у своих лечащих врачей вопросом о том, какие существуют модификации анализа.

Самым близким к RPR исследованию по сути является метод РМП. Оба теста сходны, прежде всего, в том, что являются нетрепонемными. Это значит, что для их выполнения используются не настоящие, а искусственные антигены.


диагностика крови на сифилисНесмотря на высокий процент ложных результатов, исследования часто применяются в качестве скрининговых.

Объясняется это возможностью в короткие сроки получить результаты, а также дешевизной. Это особенно важно при плановых бесплатных обследованиях большого количества человек.

Между методиками существуют весомые различия.

РМП – более старый диагностический подход. Из-за этого он хоть и дешевле, но требует наличия микроскопа в лаборатории. Так как увидеть осадок без увеличения удается не всегда.

RPR-методика – более современная вариация, для выполнения которой использование микроскопа не требуется. Так как реакцию, если она есть, будет видно на глаз.

Важно иметь в виду, что хоть анализы и похожи по сути между собой, RPR дает меньшее количество ложных результатов. Связано это с тем, что метод является более современным, требует большей точности диагностического оборудования. Естественно, цена на анализ также выше.

Основные показания для прохождения анализа на сифилис

Часто пациенты задаются вопросом о том, когда сдается RPR анализ на бледную трепонему.

Первое и самое главное показание для прохождения диагностики – это подозрение на сифилис. Причем, как отмечают доктора, чувствительность исследования высокая в раннем периоде болезни. Т.е. когда еще не прошло 4 года с момента заражения.

А вот в позднем периоде результаты могут оказаться ложными. Даже если у человека нет подозрения на сифилис, хотя бы раз в жизни ему придется пройти это обследование.


забор анализа на сифилис RPRДело в том, что методика используется в качестве скрининговой для выявления людей, которые могут быть заражены бледной трепонемой. Заболевание относится к значимым в социальном плане. Поэтому на него обследуют во время медицинских осмотров всех людей.

Назначаться анализ может в следующих ситуациях:

  • человек планирует лечь в стационар на лечение или операцию;
  • предстоит поездка в санаторий или дом отдыха;
  • необходимо оформить медицинскую книжку, чтобы устроиться на работу;
  • женщина находится в состоянии беременности (исследование проводится минимум трижды);
  • человек планирует участвовать в донорстве крови.

Также любой желающий без показаний может пройти этот тест в больнице, например, чтобы убедиться в том, что он здоров.

Анализ на сифилис RPR: особенности подготовки

Важно знать о том, как проводится исследование. Ничего сложного для пациента нет, так как вся работа выполняется в лаборатории. Все, что надо сделать человеку – посетить больницу и сдать кровь из вены.

Правда, врачи отмечают, что rpr-тест отличается высокой чувствительностью к различным воздействиям извне. Из-за этого придется непосредственно перед походом в больницу провести небольшую подготовку.

В первую очередь пациентам рекомендуют исключить наркотические вещества из употребления. Также отказаться от курения и алкоголя.


запрет на курение и алкогольПсихотропные средства, применяемые по рекомендации психиатра, также могут отменяться на время подготовки. Но только после консультации с медицинским работником.

Также за 4-5 часов до сдачи биологического материала стоит отказаться от употребления пищи. Подготовка не представляет сложностей.

Главное – ответственно отнестись к рекомендации докторов, выслушав от них инструкцию о том, как подготовиться.

Дополнительно перед анализом исключают стрессы и активные физические нагрузки, способные негативно повлиять на результаты.

Особенности расшифровки анализа на сифилис RPR

Больные на приеме у доктора узнают о том, что сразу после подозрительного контакта проходить обследование бессмысленно. Естественно, они интересуются, когда сдавать после заражения материал на RPR-диагностику. Лучше всего посетить больницу через 5-7 дней после того, как на кожном покрове обнаружится твердый шанкр.

Всего требуется около 5-6 месяцев с момента заражения и до образования шанкра.


На более раннем этапе исследование окажется бесполезным. Так как в кровеносном русле будут отсутствовать антитела к патогенному микроорганизму. Расшифровка результатов может представлять некоторые сложности. Дело в том, что в первичном и вторичном периоде заболевания методика редко дает отрицательные результаты. Исправно показывая то, что человек болен сифилисом.

С третичной формой все сложнее. Анализ с помощью реакции антитело-антиген в большинстве случаев показывает отрицательные результаты. Из-за чего приходится прибегать к более чувствительным методам диагностики. Важно иметь в виду и то, как меняются титры анализа в разных ситуациях.

Например:

  • снижение титра в 4 и более раз в первые полгода с проведенной терапии не свидетельствует о заражении, а является нормальной реакцией;
  • если после терапии уровень антител так и не понизился за полгода, стоит подумать о том, что лечение было неэффективным;
  • резкое возрастание показателей может говорить об обострении инфекционного процесса.

Оценивать результаты RPR-теста не так-то просто, как может показаться. Этим делом должен заниматься грамотный доктор.расшифровка анализа на сифилис RPR

Что может влиять на результат анализа на сифилис RPR

Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какие факторы могут повлиять на результаты исследования.

Поскольку RPR анализ отличается высокой чувствительностью к изменениям в организме, да к тому же является нетрепонемным, повлиять на него могут многие факторы.

Стоит иметь в виду, что сказываться на результатах могут:


  • активные инфекционные заболевания иной природы, протекающие в момент забора биологического материала в организме пациента;
  • некоторые процессы аутоиммунного происхождения, особенно если забор материала пришелся на фазу обострения;
  • некоторые лекарственные препараты, особенно используемые в борьбе с ВИЧ, пневмонией атипичного типа, малярией и др.;
  • возраст пациента, так как с возрастом иммунная защита организма значительно ослабевает;
  • менструальный цикл у женщин или период беременности, что также негативно влияет на иммунитет;
  • употребление внутривенно наркотических средств и др.

Анализ на сифилис RPR: вероятность ошибки

Ложноположительный результат теста с помощью реакции RPR – частый итог обследования.

Связано это с тем, что анализ относится к группе нетрепонемных. То есть для диагностики используют не собственные антигены бледной трепонемы, а искусственные. Однако, если сравнивать RPR с РМП-тестированием, выяснится, что погрешность у первого все же ниже, чем у второго.

Ложность результатов часто объясняется тем, что искусственные антигены реагируют не с нужными антителами, а с теми, что напоминают нужные по структуре и особенностям. Например, встречается положительный тест при антифосфолипидном синдроме, при беременности, на фоне острой аллергической реакции в организме.

С другой стороны, тест может дать и ложноотрицательный результат.


ложноотрицательный анализ на сифилис RPRЧаще всего это происходит, когда патология уже зашла далеко, перешла на последнюю стадию своего развития. Однако ложноотрицательный вариант результата моно получить и в том случае, если провести исследование слишком рано. В этом случае в крови будет просто недостаточно антигенов для того, чтобы реакция произошла.

Исключить ошибку можно в том случае, если полученные результаты подтвердить с помощью других исследований, обладающих более высокой чувствительностью.

Где можно пройти анализ на сифилис RPR

Среди больных, подозревающих у себя развитие сифилиса, часто звучит вопрос о том, куда обратиться, чтобы пройти обследование на это заболевание.

Самый простой вариант – это посещение кожно-венерологического диспансера по месту жительства. Там врачи смогут провести осмотр и назначить анализы, включая RPR-тестирование, если для этого будут объективные показания.

Также на базе КВД можно сдать биологические образцы добровольно. Просто для того, чтобы удостовериться в своем здоровье.

Альтернативой КВД могут стать частные диагностические лаборатории. Они обладают рядом преимуществ.

Например, в частной лаборатории всегда выше уровень анонимности, что важно для многих пациентов. Ведь частные учреждения заботятся о том, чтобы клиент был доволен обслуживанием.


Куда обратиться если положительный RPR, тоже стоит решать самому пациенту.

Лечение и последующий контроль результатов можно получить в КВД, где часть обследований и анализов будут предоставлены человеку бесплатно. Альтернатива – частный медицинский центр. Там лечение и дальнейшие анализы будут полностью платными. Однако пациент сможет не сомневаться в том, что учреждение сохранит анонимность личности.анализы на сифилис анонимно

Анализ на сифилис RPR: как подтвердить или опровергнуть полученный диагноз

Часто среди больных в кабинетах венерологов или сифилидологов звучит вопрос о том, какие анализы сдавать, если RPR положительный.

Методика носит скрининговый характер и может давать ощутимые погрешности. Поэтому для постановки окончательного диагноза исключительно ее результаты никогда не используются.

Проводятся дополнительные исследования, среди которых:

  • оценка уровня иммуноглобулинов различных фракций, позволяющая понять, как ориентировочно давно произошло заражение, насколько сильно запущен патологический процесс;
  • ПЦР-тестирование, в ходе которого в биологических жидкостях человеческого организма выявляют ДНК бледной трепонемы и, если оно есть, диагноз считают подтвержденным;
  • ИФА или реакцию иммунофлюорисценции, которая также способна показать наличие в организме бледной трепонемы или, как минимум, ее следов и др.

Как интерпретировать итоги RPR при положительных других анализах, решает доктор. В большинстве случаев, если технология забора биоматериала не была нарушена, исключена вероятность ложных реакций.

Тестирование оценивается положительно, а значит, больному требуется лечение.

Анализ на сифилис RPR: положительный результат в беременность

Нередко у представительниц прекрасного пола, находящихся в положении, диагностируется положительный результат RPR. Естественно, женщины пугаются, испытывая тревогу не только за свое здоровье, но и за здоровье своего будущего малыша.

Однако врачи отмечают, что преждевременно беспокоиться не стоит.

Что делают если положительный RPR при беременности выявлен, интересуются пациентки. Все очень просто. Доктор, занимающийся ведением беременной женщины, проводит ее дообследование.забор крови на сифилисДело в том, что исследование в период вынашивания плода нередко дает ложные результаты. Из-за того, что в организме женщины происходят сложные гормональные перестройки. Вырабатывается множество новых антител в ответ на изменения, снижается иммунитет.

Задача врача состоит в том, чтобы исключить у женщины сифилис. Для этого проводят тщательный осмотр, устанавливают наличие факторов риска заражения. Рекомендуют пройти дополнительные обследования.

Только по итогам дополнительных анализов можно поставить беременной диагноз и назначить какую-либо терапию!


Определение схемы лечения сифилиса

Если положительный RPR был подтвержден другими исследованиями, пациенту подбирается схема терапии.

В лечении предпочтение отдается препаратам пенициллина. Так как они действуют на патогенную бактерию, вызывающую негативные симптомы, лучше всего.лечение сифилисаПри переносимости пенициллина доктор подберет другие антибиотики.

Исходя из общего состояния пациента и его аллергической предрасположенности. Помимо антибиотиков, являющихся основными средствами в лечении, пациентам назначаются иммуномодуляторы, средства местной терапии, препараты витаминов. Все это необходимо, чтобы активизировать иммунитет в борьбе с болезнетворным микроорганизмом, ускорить выздоровление.

Сифилис – заболевание, отличающееся широкой распространенностью в современном мире. Чтобы легко проводить скрининговое обследование населения, изобретены многие тесты на это заболевание, и один из них RPR.

При правильном использовании и интерпретации он оказывает неоценимую помощь доктору в диагностике этого непростого, опасного для жизни пациента заболевания. Главное – не отказываться от прохождения обследования!

При подозрении на сифилис обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

Источник: onvenerolog.ru

Показания к выполнению анализа

Скрининовое обследование беременных женщин.

Скрининговое обследование лиц с беспорядочными половыми контактами.

Предоперационная подготовка.

Донорство.

Диагностика сифилиса при наличии специфических симптомов, в первую очередь с шанкром на половых органах или в ротовой полости.

Подготовка к исследованию

От последнего приёма пищи до взятия крови временной промежуток должен быть более восьми часов.

Накануне исключить из рациона питания жирные продукты, не принимать спиртные напитки.

За 1 час перед взятием крови на анализ нельзя курить.

Не рекомендуется сдавать кровь сразу после выполнения флюорографии, рентгенографии, УЗИ, физиотерапевтических процедур.

Кровь на исследование сдают утром натощак, исключается даже чай или кофе.

Допустимо пить обычную воду.

За 20-30 минут до исследования пациенту рекомендован эмоциональный и физический покой.

Источник: medportal.org

Неспецифический антифосфолипидный (реагиновый) тест, современный аналог реакции Вассермана (RW), модификация VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) теста.

RPR — скрининговый нетрепонемный тест, выявляющий антитела (реагины) класса IgG и IgM к липоидному и липопротеиноподобному материалу, высвобождаемому из повреждённых клеток больного сифилисом.

Тест RPR рекомендован приказом МЗ РФ для первичного скрининга и наблюдения за ходом лечения сифилиса.

Антифосфолипидные антитела, выявляемые этим тестом, находят у 70 — 80% лиц с первичным сифилисом и почти у 100% пациентов с вторичным и ранним латентным сифилисом. В большинстве случаев позитивная RPR-реакция наблюдается через 7 — 10 дней после появления первичного шанкра или через 3 — 5 недель после инфицирования. Титры снижаются после наступления вторичной стадии сифилиса. Около 30% пациентов с поздним сифилисом становятся нереактивными по RPR-тесту. Снижение титра RPR в 4 и более раз в течение 1 года после проведённой терапии подтверждает её эффективность. В 90 — 98% случаев после лечения сифилиса результат RPR-теста становится отрицательным.

Тест не является специфическим. Поэтому иногда возможно возникновение ложноположительных реакций. Антилипоидные антитела могут появляться не только вследствие сифилиса или других трепонемных инфекций, но и в ответ на развитие нетрепонемных заболеваний острой или хронической природы, при которых наблюдается повреждение тканей (особенно часто при аутоиммунных заболеваниях).

При получении положительного результата в RPR-тесте, пациент должен обследоваться дерматовенерологом с повторным исследованием крови с помощью специфического трепонемного диагностического теста (в лаборатории ИНВИТРО — тест , антитела к Treponema pallidum IgG/IgM, выявляющий специфические антитела к антигену Treponema pallidum).

Редкие ложноотрицательные результаты в реакции RPR (эффект «прозоны» при очень высоких титрах реагиновых антител) могут быть исключены одновременным назначением теста сифилис ИФА IgG/IgM. Эти два исследования являются взаимодополняющими; комбинированное использование тестов RPR и ИФА-теста IgG/IgM представляет лучший вариант скринингового исследования для обнаружения или исключения сифилиса на всех стадиях.

Особенности инфекции. Сифилис — хроническое инфекционное заболевание, характеризующееся мультисистемным поражением организма. Возбудитель сифилиса — Treponema pallidum — неустойчива в окружающей среде, но хорошо сохраняется во влажных биологических материалах (сперме, влагалищном секрете, слизи, гное и др.). Передаётся половым, парентеральным, бытовым, трансплацентарным путями. Увеличивают риск заражения другие инфекции, передающиеся половым путём: герпес, хламидиоз, папилломавирусная инфекция и др., а также повреждение слизистой оболочки при анальных контактах. Бледная трепонема имеет несколько антигенов, обусловливающих выработку антител. Один из них аналогичен кардиолипину, что позволяет использовать последний для обнаружения иммунитета к бледной трепонеме.

Заражение от больного человека возможно в любом периоде сифилиса. Наиболее инфекционными являются первичный и вторичный сифилис при наличии активных проявлений на коже и слизистых оболочках. Бледная трепонема проникает через микроповреждения кожи или слизистых в лимфатические сосуды, затем в лимфатические узлы. Далее возбудитель распространяется по органам и может определяться во всех биологических средах (слюне, грудном молоке, сперме и т.д.).

При классическом течении инкубационный период длится 3 — 4 недели, первичный серонегативный — 1 месяц, затем первичный серопозитивный — 1 месяц, затем вторичный период — 2 — 4 года, далее третичный период. В первичном периоде возникает твёрдый шанкр (безболезненная язва или эрозия с плотным дном в месте проникновения бледной трепонемы), сопровождающийся регионарным лимфангиитом и лимфаденитом. В конце первичного периода шанкр самостоятельно заживает, а лимфаденит переходит в полиаденит и сохраняется до пяти месяцев.

Первое генерализованное высыпание является признаком начала вторичного периода. Вторичные сифилиды появляются волнообразно (на 1,5 — 2 месяца каждая волна) и самостоятельно исчезают. Могут быть представлены пятнистыми, папулезными, пустулезными сифилидами, сифилитической аллопецией (облысением) и сифилитической лейкодермой («ожерелье Венеры»). На втором полугодии вторичного сифилиса исчезает полиаденит.

Появление третичных сифилидов (бугорков и гумм) знаменует начало третичного периода, который наступает у 40% нелеченных и неполноценно леченных больных. Волны третичного периода разделены более продолжительными (иногда многолетними) периодами латентного течения инфекции. В поражённых органах и тканях возникают деструктивные изменения. В третичных сифилидах содержится крайне мало трепонем, поэтому они практически не заразны. Напряжённость иммунитета падает (т. к. уменьшается количество бледных трепонем), поэтому становится возможным новое инфицирование (ресуперинфекция).

Передача сифилиса потомству наиболее вероятна в первые три года заболевания. В результате возникают поздние выкидыши (на 12 — 16 неделе), мертворождение, ранний и поздний врождённый сифилис. Поражение плода наиболее вероятно на 5-м месяце беременности и в родах. Проявления раннего врождённого сифилиса возникают сразу после рождения и аналогичны проявлениям вторичного сифилиса. Сифилиды позднего врождённого сифилиса возникают в возрасте 5 — 17 лет и аналогичны проявлениям третичного сифилиса. К безусловным признакам относится триада Гетчинсона (гетчинсоновские зубы, паренхиматозный кератит, лабиринтная глухота).

Диагноз сифилиса должен быть подтвержден лабораторными исследованиями, однако, в некоторых случаях может быть обоснован, несмотря на отрицательные результаты серологических реакций.

Особое значение лабораторная диагностика сифилиса имеет у следующих категорий обследуемых:

Категория обследуемых Причины
Женщины, при подготовке к беременности 1. Возможно латентное течение или обезглавленный сифилис (сифилис без твердого шанкра, трансфузионный сифилис, когда трепонема попадает непостредственно в кровь при переливании крови, порезе) 2. Возможна бытовая или парентеральная передача
Беременные женщины Проведение комплексной терапии в первые 4 месяца беременности позволяет избежать инфицирования плода

Источник: www.invitro.ru

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе — амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

  1. 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2Получение быстрого ответа;
  3. 3Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3Злокачественные новообразования.
  4. 4Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6Беременность.
  7. 7Употребление алкоголя.
  8. 8Приём жирной пищи.
  9. 9Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL — это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

  1. 1сравнительно высокая чувствительность;
  2. 2сравнительно высокая специфичность;
  3. 3легкость выполнения;
  4. 4малая стоимость реактивов;
  5. 5получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация — РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные — более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

  1. 1От 0 до 20 — отрицательная проба.
  2. 2От 21 до 50 — слабоположительная проба.
  3. 3От 50 до 100 — положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Источник: sterilno.net

Кратко о сифилисе

Это хроническое инфекционное заболевание, при котором поражаются органы и системы организма. Возбудитель болезни отлично выживает в биологических средах – сперме, слизи, гное, влагалищном секрете. Существует несколько путей заражения этим венерическим заболеванием:

  • половой;
  • парентеральный;
  • бытовой;
  • трансплацентарный.

После инфицирования в организме синтезируется два вида антител:

  • Специфические, или противотрепонемные, они направлены против самой трепонемы.
  • Неспецифические, или антикардиолипиновые, действуют против клеточных компонентов, которые, поражаясь возбудителем болезни, разрушаются, а также против липидов организма, попадающих в кровяное русло после гибели клеток естественным путем. Исследование на сифилис RPR как раз и выявляет неспецифические антитела к липидным компонентам.

В составе возбудителя есть антигены, на которые иммунная система индивида синтезирует антитела. Один из антигенов сходен с кардиолипином, благодаря этому его используют для обнаружения иммунного ответа к трепонеме.

Инкубационный период в среднем составляет 21 день. Различают сифилис:

  • Первичный – с момента появления твердого шанкра (язвочки возникают в месте внедрения бактерии, исчезают они самостоятельно через две-шесть недель) и до образования сыпи. Наблюдается увеличение лимфатических узлов. В этот период антитела еще не выработались и в крови их не выявить.
  • Вторичный – такие симптомы, как общее недомогание, повышение температуры, головная боль, сыпь, выявляются через месяц или два после образования язв. Вскоре признаки заболевания исчезают, и болезнь переходит в латентную стадию. Низкий иммунитет провоцирует рецидивы, так как возбудитель не исчезает из организма. Клиническая картина в этом случае сходна со вторичным сифилисом.
  • Третичный – возникает при отсутствии терапии в течение длительного периода. Поражаются органы и системы организма.

Подтверждают диагноз лабораторной диагностикой.

Общая информация об исследовании

Для диагностики сифилиса применяют две группы анализов – трепонемные и нетрепонемные. К последним относится исследование на сифилис RPR. Тест прост в постановке реакции, ответ готов через короткий промежуток времени. Чувствительность зависит от стадии заболевания и составляет при сифилисе:

  • позднем – 73 %;
  • вторичном – 100 %;
  • первичном – 86 %;
  • скрытом – 98 %.

Среди преимуществ этого теста выделяют:

  • быстрый ответ;
  • высокую чувствительность среди всех других нетрепонемных анализов при позднем, первичном и скрытом заболевании;
  • возможность использования при массовых скринингах;
  • низкую цену анализа;
  • наличие готовых наборов для исследования;
  • высокую сочетаемость с трепонемными тестами.

Министерство здравоохранения Российской Федерации рекомендует этот анализ для контроля за процессом лечения и в качестве первичного скрининга.

Положительная реакция наблюдается по прошествии трех-пяти недель после инфицирования или через семь-десять дней после появления язвочек. На вторичной стадии заболевания титры снижаются. Снижение титра в четыре и более раза на протяжении года свидетельствует об эффективности проводимой терапии.

Нетрепонемные тесты

Используя их, обнаруживают антитела против липида, входящего в мембрану бактерий и митохондрий. Они появляются в организме индивида через неделю после образования твердого шанкра. Чувствительность нетрепонемных тестов высокая при первичном и вторичном сифилисе, т. е. если человек заражен, то итог будет положительным. Однако не исключены и ложноположительные результаты, так как образуются антитела против липида и при других патологических состояниях. Особенность нетрепонемных тестов – это появление антител в остром периоде болезни. Таким образом, при выздоровлении их количество снижается, что свидетельствует о качестве лечения.

Микрореакция преципитации на сифилис

Основано это исследование на иммунологической реакции «антиген — антитело». Микрореакция на сифилис RPR – это нетрепонемный тест, благодаря ему выявляют реагиновые антитела в крови, которые производятся организмом индивида против липидов дефектных клеток в результате их повреждения спирохетой, а также белков липопротеинов кожицы бактерий.

Ввиду того что антилипидные антитела синтезируется и при других патологиях, сопровождающихся разрушением ткани, микрореакцию преципитации относят к отборочным тестам. Для проведения исследования требуется небольшое количество реагентов и биоматериала (кровь, жидкость спиномозговая) поэтому оно и получило название «микрореакция».

Ошибки при постановке микрореакции преципитации

К ложноположительным и ложноотрицательным итогам приводят погрешности, допущенные при проведении исследования на сифилис RPR:

  • Наличие микроорганизмов в эмульсии.
  • Применение двузамещенного цитрата натрия (disodium citrate) вместо трехзамещенного (trisodium citrate).
  • Несоблюдение условий и сроков хранения антигена, растворов, эмульсии, биоматериала.
  • Некачественное взбалтывание, что ведет к неравномерной концентрации антигена в эмульсии.
  • Нарушение технологии взятия крови из пальца.
  • Использование грязных пробирок, растворов, пластинок, пипеток.

Исследование на сифилис

С помощью лабораторного анализа крови на сифилис (RPR, RW) выявляют антитела к возбудителю инфекции, т. е. бледной трепонеме.

Проводится это исследование при массовом обследовании некоторых групп населения на сифилис. Кроме того, анализ показан:

  • всем индивидам перед хирургическим вмешательством;
  • лицам, имеющим партнера с диагностированным заболеванием, и в случае бытового контакта с больным вторичным сифилисом;
  • индивидам, имеющим подтвержденный диагноз иной половой инфекции;
  • малышам, родившимся от материи, болеющей сифилисом;
  • лицам с клиническими симптомами сифилиса;
  • с целью подтверждения результатов скрининга;
  • женщинам, ожидающим малыша;
  • донорам;
  • лицам, имеющим неразборчивые половые связи;
  • при болевом синдроме в костях;
  • при обильных выделениях из половых органов и появлении язвенных поражений на гениталиях, сыпи на дерме и слизистой, а также при увеличении лимфатических узлов.

Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест)

Антикардиолипиновый тест – это один из вариантов реакции Вассермана, точнее сказать, более современный анализ, с помощью которого обнаруживают иммуноглобулины G и M к фосфолипидам, появляющимся из клеток, пораженных возбудителем. Он относится к неспецифическим тестам, и возможны ложноположительные результаты, так как антитела к фосфолипидам выявляются и при других болезнях инфекционного и аутоиммунного характера. Рекомендуют это исследование:

  • при обследовании доноров;
  • диагностике скрытого сифилиса;
  • подозрении на заболевание.

Антикардиолипиновые тела выявляются примерно у восьмидесяти процентов индивидов с первичным и у ста процентов – со вторичным сифилисом. Положительный анализ на сифилис RPR регистрируется через семь дней после возникновения твердого шанкра, т. е. примерно через месяц после заражения.

Подготовка к исследованию

Особой подготовки к анализу не требуется. Биоматериал сдают утром, на голодный желудок. За двенадцать часов до похода в лабораторию следует исключить кофейные, чайные, спиртосодержащие напитки, а также прием пищи. Разрешается выпить простой воды. Накануне исключают прием жирных продуктов. За шестьдесят минут до сдачи биоматериала противопоказано табакокурение. В день сдачи анализа нежелательно выполнять следующие манипуляции:

  • флюорографическое или рентгенологическое исследование;
  • УЗИ;
  • физиотерапевтические процедуры.

Расшифровка результатов

Отрицательный RPR на сифилис означает:

  • Инфекция отсутствует, сифилиса нет.
  • Ранний первичный и поздний третичный сифилис не исключается. Если с момента внедрения возбудителя прошло менее трех недель, то антитела против кардиолопина могут не выявиться. Для контроля рекомендуется повторить тест через две недели. После вторичной стадии количество антител уменьшается и у части пациентов итог будет отрицательным.

Положительный результат говорить о следующем:

  • первый год после того как вылечили болезнь;
  • серопозитивный первичный, вторичный и третичный сифилис.

При получении положительного ответа индивиду необходимо дополнительное обследование у венеролога.

Ввиду того что тест неспецифический, остается вероятность ложноположительных итогов. Наиболее часто такое встречается при следующих состояниях:

  • воспаление легких;
  • диабет сахарный;
  • гепатит вирусной природы;
  • туберкулез;
  • алкоголизм;
  • беременность;
  • после вакцинации;
  • онкология;
  • наркомания.

Доктора оценивают терапию сифилиса эффективной при условии, что количество неспецифических антител в крови у индивида в течение двенадцати месяцев снизится в четыре раза. После полного завершения курсового лечения исследование крови на сифилис RPR дает отрицательный результат у девяноста процентов больных.

Заключение

Исследование крови дает возможность обнаружить антитела к возбудителю венерического заболевания, т. е. бледной трепонеме. Сдают анализ не только индивиды, предпочитающие активную половую жизнь, но и пациенты перед операцией, будущие мамочки и некоторые другие категории граждан. Для достоверности картины к сдаче теста доктора рекомендуют подготовиться.

Исследование на сифилис RPR не проводится для диагностирования заболевания, и об этом надо помнить. Подтверждают болезнь трепонемными тестами. Окончательный диагноз выставляет только доктор.

Источник: fb.ru

Rpr анализ крови что это

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.