Российский национально исследовательский медицинский университет им. Н.И.Пирогова

Кафедра дерматовенерологии педиатрического факультета

Доклад на тему: Лабораторные методы диагностики сифилиса

Выполнил: Студент 440 в группы

Педиатрического факультета

Серанов Игорь Анатольевич

2013 годъ

Содержание

  1. Нетрепонемные исследования


  2. Трепонемные исследования

  3. Комплекс проведения серологических реакций

  4. Реакция Вассермана

  5. Реакция иммунофлюоресценции

  6. Реакция имунного прилипания

  7. Реакция иммобилизации бледных трепонем

  8. Реакция иммунофлюоресценцией адсорбцией бледных трепонем

  9. Реакция гемагглютинационная

  10. Иммуноферментный анализ

  11. Полимеразная цепная реакция

Все серологические методы исследования, которые применяются на сегодня, условно разделяются на два вида: нетрепонемные, отборочные (НТТ)- и трепонемные, которые подтверждают наличие возбудителя (ТТ).Сифилис протекает очень сложно, клиника очень смазана и не всегда проявляется, поэтому для постановления правильного диагноза используют сразу несколько серологических тестов. При визуалированном подтверждении присутствия во взятом материале бледной трепонемы (при помощи микроскопа) диагноз ставится сразу же, и остальные тесты проводятся редко.


Нетрепонемные исследования (тесты) — НТТ — это так называемые отборочные исследования, они не очень дорого стоят и при их помощи можно обследовать достаточно большое число пациентов, к тому же результаты при многих тестах готовы очень быстро. Но при ложном течении заболевания, при низкой чувствительности  проведение таких тестов нецелесообразно, 100%-ный результат получить не удастся.

При проведении нетрепонемных тестов в материале, который исследуется, обнаруживаются антитела, которые реагируют с кардиолипин — лецитиновым антигеном. Одним из первых тестов был метод, основанный на иммунологической реакции Борде — Жангу, где в качестве антигена выступал экстракт печени новорожденного ребёнка, который умер от сифилиса. На сегодня при проведении таких тестов антигеном выступают лецитин, холестерин и кардиолипин.

За границей, в частности в США используют 4 нетрепонемных метода, которые делятся на два вида: методы, которые позволяют визуально определить результаты реакции (RPR и TRUST) и методы микроскопического считывания результатов(USR и VDRL).

К нетрепонемным методам диагностики относится непрямой иммуноферментный анализ с использованием кардиолипина в качестве антигена. У нас в стране и в странах СНГ в качестве нетрепонемных тестов выступают реакция плазмы с инактивированной сывороткой (МР) и реакция, при которой происходит связывание комплимента с кардиолипином (РСК).


Все методы нетрепонемной диагностики очень похожи друг с другом. У них у всех невысокая стоимость, их просто и быстро провести. Эти виды тестов не подходят при выявлении заболевания на первичной стадии и при  сифилисе, который протекает скрытно (латентная форма сифилиса). Антитела, которые определяются нетрепонемным тестом появляются, где то через месяц после инфицирования трепонемой. В большинстве случаев у больных, которые лечили первичную стадию сифилиса, примерно около года нетрепонемные тесты имеют отрицательный результат.

Трепонемные исследования (тесты) — ТТ стоят намного дороже, техника проведения их очень сложная и они используются для подтверждения положительных результатов, которые были получены при нетрепонемных исследованиях.

Как мы говорили выше трепонемные методы применяют для того, чтобы подтвердить наличие бледной трепонемы в организме, которое было выявлено при помощи нетрепонемных тестов. Так же их проводят, если проводимые анализы так и не дали положительного результата, но клиника предполагает наличие заболевания. После полного излечения сифилиса более чем у 80% вылечившихся наблюдается положительная реакция при проведении трепонемных тестов     ещё несколько лет, а у некоторых — всю жизнь. Исходя из этого трепонемные тесты не используют для профилактических осмотров у людей, которые прошли полный курс лечения.


Научные исследования в области иммунологии и молекулярной биологии продолжаются постоянно и при помощи новейших технологий появляются всё новые тесты для диагностики сифилиса, которые прочно занимают лидирующие позиции. Один из таких тестов, который прочно вошёл в практику — иммуноферментный анализ (ИФА), а многие исследовательские методы находятся на стадиях разработки.

Тот комплекс проведения серологических исследований, который проводят в России включает в себя комплексное проведение серологических реакций: 

стандартных серологических реакций –

  • реакцию связывания комплемента(реакция Вассермана),

  • реакцию с трепонемным антигеном и реакцию с кардиолипином;

груповых трепонемных реакций-

  • реакцию иммунофлюоресценции (РИФ)

  • реакцию иммунного прилипания(РИП);

видоспецифических протеиновых трепонемных реакций –

  • реакцию иммобилизации трепонем(РИТ),

  • РИФ — абс и её варианты (IgM-FTA-ABS, 19S-IgM-FTA-ABS),

  • реакцию пассивной гемаглюцинации трепонем(РПГА).

Если серологические реакции использовать в комплексе, это даст возможность выявить заболевание на ранних этапах заболевания.


Реакция Вассермана — это метод связывания комплемента. Для проведения реакции в качестве антигена используют экстракты, которые изготавливаются из бледных трепонем (специфические антигены) и кардиолипин — это экстракт приготовленный из сердечной мышцы быка(неспецифические антигены). Чем больше в исследуемом материале наблюдается бледных трепонем, тем больше степень заболевания и оценивают степень плюсами:                            

1) —  отрицательная;                                     2) + сомнительная;                                     3) ++ слабоположительная;                                 4) +++ положительная;                                     5) ++++    резкоположительная.                                

Реакцию Вассермана (Реакция связывания комплемента) в обязательном порядке проводят вместе с осадочными реакциями – Закс — Витебского и Кана. Иммунологическая природа реакций, в общем- то такая же, как и у реакции Вассермана, но для этих реакций требуются более насыщенные антигены, которые при вступлении в реакцию с реагинами сыворотки дают больший осадок. Серонегативный первичный сифилис ставят, если стандартные серологические реакции дали отрицательный результат. Выявление сифилиса реакцией Вассермана эффективно при серопозитивном вторичном сифилисе, здесь результаты теста на 100% верны. На третичной стадии активного сифилиса результаты верны у  более половины больных, а на последних стадиях сифилиса, при поражении внутренних органов и систем, результаты верны у половины больных. У больных ранним врождённым сифилисом серологические реакции дают положительный результат почти всегда, а у больных с поздним врождённым сифилисом — почти в 80% случаев.


Принцип РСК заключается в том, что реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединения с различными антигенами. Образовавшиеся комплексы сортируют введенный в реакцию комплемент. Для индикации комплекса реагины–антиген–комплемент используется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). При наличии комплекса эритроциты выпадают в осадок. Что заметно не вооруженынм глазом. Выраженность гемолиза обозначается врачом ключами: резко положительная 4+, положительная 3+, слабоположительная 2+ ли 1+ и отрицательная. Кроме качественной оценки этих реакций имеется и количественная, имеющая значение в диагностике некоторых стадий сифилиса и при контроле за эффективностью терапии

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на выявлении антител, которые метят специальным флуоресцентным раствором, для того, чтобы в фиолетовых лучах кварцевой лампы выявить соединённые с антигеном антитела. Эта реакция имеет высокую чувствительность и помогает выявить заболевание на первичной стадии серонегативного сифилиса.


к же именно этот тест помогает выявить заболевание у пациентов, у которых заболевание протекает латентно или на поздних стадиях. Существует несколько типов таких реакций и наиболее высоко ценится РИФ-200, при помощи, которой можно выявлять скрытый сифилис и распознать неспецифические результаты КСР. Но, несмотря на высокие показатели РИФа-200, постановка диагноза происходит после проведения всех клинических анализов. РИФ не подходит для наблюдения за пациентами после проведения полного лечения, так как достаточно медленно негативируется на этапе проведения лечения.    

Реакция иммуного прилипания (РИП). В основе этой реакции лежит прилипание трепонем, которые сенсибилизированны сывороткой, к эритроцитам и выпадение их в осадок. Результаты оцениваются по следующей таблице:

-отрицательная- 0-20%

-сомнительная-21-30%;

-слабоположительная-31-50%;

-положительная-51-100%.

По всем показателям РИП очень похожа на РИФ  и РИТ. Эта реакция проводится в нескольких случаях, если на основании клинических проявлений, анамнеза, лабораторных исследований сифилис не подтверждается, для контроля за заболеванием после получения необходимого лечения и для подтверждения результатов КСР.  

                                      Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИТ).Попав в среду, где есть иммобилизины испытуемой сыворотки и активный комплемент, бледные трепонемы теряют подвижность.


этом и основывается эта реакция. РИТ очень специфична и применяется для распознания скрытого сифилиса, для диагностики беременных , у которых подозревают сифилис и многих других случаев, при которых стандартные серологические  тесты     мало специфичны. Большой недостаток этой реакции то, что она стоит очень дорого и её проведение — очень сложный процесс. Результаты считываются по процентным данным иммобилизации бледных трепонем:

-отрицательная — до 20%;                                 -сомнительная -21-30%;                                 -слабоположительная -31-50%;                             -положительная -51-100%.                                

В связи с тем, что иммобилизины появляются в крови позже других антител, реакция становится положительной немного позже, чем при проведении других реакций. На первичном этапе инфицирования, как правило, наблюдается отрицательная или слабоположительная реакция. На вторичном этапе сифилиса, хотя появление иммобилизинов  в сыворотке крови у больного наблюдается до 60%, реакция положительна почти у половины исследуемых. При рецидиве вторичной стадии сифилиса РИТ положительна почти у 90% больных. На третичной стадии развития сифилиса, при поражении внутренних органов, в том числе и нервной системы, когда  реакция Вассермана даёт отрицательные результаты, реакция иммобилизации бледных трепонем положительна почти у 100% больных.


>На раннем этапе врождённого сифилиса реакция имеет  положительный результат почти у всех больных, а на позднем этапе врождённого сифилиса — почти у 100% больных. Серопозитивный латентный сифилис подтверждается только после проведения РИТ, которую проводят после получения положительных результатов при проведении других серологических реакций. РИТ не применяют для контроля за заболеванием у больных, которые получили необходимое лечение.

Реакция иммунофлуоресценции абсорбции с бледной трепонемой (FTA-ABS).Если реакцию проводят для больного, который болен сифилисом и не лечился, то тогда эта реакция даёт положительный результат всегда. Так же высока вероятность выявить инфекцию при помощи FTA-ABS в самом начале заболевания. Реакция обладает большой чувствительностью и специфичностью. Для диагностики  латентного сифилиса и в тех случаях, когда уже было проведено несколько тестов и они показали отрицательный результат, но клиника говорит о инфицировании бледной трепонемой, в таких случаях диагноз ставят часто опираясь на результаты FTA-ABS.             Буквально через неделю после того, как бледная трепонема попала в организм, начинают вырабатываться специфические антитела IgM, которые со временем перестают появляться и через 2 года уже не определяются. Для того, чтобы понять даёт ли предложенное лечение эффект, проводят специальные тесты, которые определяют специфичность этих антител. Таких тестов на сегодня есть несколько, но проведение их слишком дорого, поэтому для большинства больных эти тесты не проводят.


Гемагглютинационная реакция, которая определяет специфические антитела к бледной трепонеме (микро-РПГА). Для этой реакции в качестве антигена служат трепонемы, поэтому эта реакция очень специфична и даёт правдивые результаты в большинстве случаев.

Иммуноферментный анализ (ИФА) один из наиболее специфичных для диагностики сифилиса. На сегодня чаще всего используют непрямой вариант ИФА. Преимущества этого метода исследования очевидны: не слишком большая стоимость, лёгкость проведения, достаточна высокая точность результата, при помощи этого анализа можно выявить сифилис на ранней стадии, быстрое получение результатов.

В основе метода иммуноблотинга лежит иммуноферментный анализ, который сочетается с электрофорезом. Является одним из самых специфичных анализов и при его помощи происходит подтверждение инфицирования сифилисом.

Полимеразную цепную реакцию (специфический метод исследования) проводят для установления диагноза при скрытых течениях сифилисной инфекции. При проведении ПЦР в испытуемом материале находят возбудителя, даже на первичном этапе заболевания. Обнаруживаемый генетический материал при помощи ДНК делится и таким образом обнаружить возбудителя становится очень просто. При нейросифилисе, когда выявить инфекцию бывает очень затруднительно при проведении других анализов из-за очень низкой чувствительности, при врождённом сифилисе, при первичной стадии серонегативного сифилиса и для постановки диагноза у ВИЧ-инфицированных проведение ПЦР незаменимо.                                              Исследование спинномозговой жидкости при сифилисе проводят, если есть клинические поражения нервной системы на ранней стадии заболевания, при скрытой форме и обязательно ещё до начала лечения. Так же этот анализ назначается для больных нейросифилисом на поздних стадиях сифилиса и при латентной форме. В клинической лаборатории проводят исследование цитоза, содержание белка, реакции Панди и Нонне — Апельта. В серологических лабораториях проводится реакция Вассермана, реакция Ланге, РИФ, РИФю,РИФц, РИТ.

Источник: StudFiles.net

Подозрение на сифилис – к какому врачу идти?

Большое распространение заболевание получило потому, что многие молодые люди просто не знают, как определить сифилис, какие обследования необходимо пройти. Лечением половых инфекций занимаются врачи венерологи или дерматовенерологи, так как в большинстве случаев подобные инфекции сопровождаются повреждением кожных покровов. Медики советуют с профилактической целью обследоваться каждому пациенту репродуктивного возраста. Болезнь часто протекает в скрытой форме, поэтому выявить ее можно не всегда.

Методы диагностики сифилиса

Диагностические мероприятия по выявлению заболевания основываются на клинических и лабораторных данных. Диагноз «сифилис» ставится только после получения положительных результатов лабораторного исследования. Ранняя диагностика сифилиса исключает прогрессирование заболевания. Первичный сифилис определяется исследованием отделяемого твердого шанкра эрозивных папул. Среди основных методов лабораторной диагностики сифилиса необходимо выделить:

  1. Бактериоскопию.
  2. Серологическое исследование (специфическое и неспецифическое).
  3. Гистологию (при третичном сифилисе).
  4. Микроскопию (исследование нативного препарата, отделяемого эрозивных или язвенных высыпаний, пунктата из лимфоузла).

Микробиологическая диагностика сифилиса

Основу данного типа обследования составляет бактериоскопический метод диагностики сифилиса. Он предполагает обнаружение T.pallidum в материале, забранном из очагов воспаления:

  • твердый шанкр;
  • эрозивные нарушения;
  • лимфоузлы;
  • спинной мозг.

Предварительно врач протирает место забора материала тампоном с физраствором, затем раздражает поверхность эрозии специальной петлей, пока из нее не покажется тканевая жидкость.

При этом избегают смешивания материала с кровью. Жидкость помещается на предметное стекло. Препарат, полученный таким способом, исследуется с помощью микроскопа. Методы микробиологической диагностики сифилиса основываются на обнаружении возбудителя в материале. При отрицательном результате исследование проводят несколько дней подряд для полного исключения болезни.

ранняя диагностика сифилиса

Серологическая диагностика сифилиса

Для выявления и подтверждения диагноза «сифилис» в случае поздних и скрытых форм болезней основы диагностики составляет серологический метод. В большинстве случаев для диагностики сифилиса используют реакцию Вассермана. Метод предполагает исследование венозной крови пациентов, которые обнаруживают антитела к антигенам возбудителя. Такой анализ на бледную трепонему помогает выявить заболевание даже при отсутствии явных клинических симптомов.

В зависимости от состава используемых для диагностики веществ, серологические методы подразделяют на:

  1. Специфические (трепонемные).
  2. Неспецифические (нетрепонемные).

Трепонемные тесты

Трепонемные тесты – это метод диагностики, использующий в качестве основы специфические антигены Treponemapallidum. Метод используется как для постановки, так и для подтверждения диагноза, для дифференциальной диагностики сифилиса. Все специфические тесты имеют высокую чувствительность и точные результаты. Механизмы проведения специфических тестов неодинаковы, поэтому они имеют различные показания к применению. К трепонемным тестам относят следующие методы лабораторной диагностики сифилиса:

  1. Реакцию связывания комплемента (реакция Вассермана, РВ) с трепонемным антигеном – РСКт.
  2. Реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ.
  3. Реакцию иммунофлюоресценции – РИФ. Применяется в нескольких модификациях: РИФ-200 (FTA-200); РИФ-абс; РИФц – реакция иммунофлюоресценции с цельной кровью или спинномозговой жидкостью.
  4. Реакцию пассивной гемагглютинации – РПГА.
  5. Иммуноферментный анализ – ИФА.
  6. Иммуноблотинг.

Нетрепонемные тесты

Нетрепонемные тесты на сифилис используются в качестве отборочных и не подходят для окончательной диагностики, выставления диагноза. Они активно применяются для обследования больших групп населения с целью профилактических осмотров при возникновении неблагоприятной эпидемиологической ситуации. Тест обладает простотой проведения, имеет высокую чувствительность. Результат диагностики оценивается врачом. Чувствительность неспецифических тестов при ранних формах заболевания составляет около 70 %, а при вторичном сифилисе – 100 %.

К нетрепонемным тестам диагностики сифилиса относятся:

  1. RPR (RapidPlasmaReagins).
  2. Тест с инактивированной сывороткой – МРП (микрореакция преципитации с кардиолипиновым антигеном).

Данные флокуляционные тесты характеризуются простотой оценки. В ходе реакции образуется комплекс «антиген + антитело», который формирует хлопья, различимые с помощью увеличительного стекла. Роль антигена в тесте выполняет кардиолипиновый антиген, который получают из сердечной мышцы быка. Связь с антигенами возбудителя сифилиса при этом отсутствует, поэтому тесты и получили название нетрепонемные.

Экспресс-диагностика сифилиса

Современные методы диагностики сифилиса предполагают выявление заболевания на ранних стадиях. В качестве метода экспресс-диагностики используется RapidPlasmaReagin(RPR). Тест направлен на определение концентрации в крови антител к возбудителю сифилиса. При заражении бледная трепонема в организме формирует защитные антитела IgG и IgM. Наличие их в образце забранной крови является косвенным доказательством присутствия в организме бледной трепонемы. Данная диагностика сифилиса помогает установить точный срок продолжительности заболевания, время инфицирования.

Анализы на сифилис – расшифровка

Современная лабораторная диагностика сифилиса основывается следующих методах:

  • нетрепонемный тест – RPR или VDRL;
  • трепонемные тесты – РИФ и РПГА.

В странах СНГ для диагностики сифилиса чаще применяют реакцию Вассермана, также реакцию иммобилизации бледных трепонем – РИБТ. Оценку полученных результатов производит только врач, который учитывает клинические проявления заболевания, стадию патологии, состояние пациента. С примерными результатами исследований можно ознакомиться в таблице ниже.ото

трепонемные тесты это

Дифференциальная диагностика сифилиса

Когда у врача после первичного осмотра возникает подозрение на сифилис, он направляет пациента для сдачи крови на RV. Если результаты исследования подтвердили наличие бледной трепонемы в организме, проводится дифференциальная диагностика с определением стадии заболевания. При первичном сифилисе чаще бывают положительными РИФ и ИФА, однако это не позволяет выставить диагноз «сифилис».

Диагностика вторичного сифилиса не вызывает затруднений – резким положительным является результат по всем серологическим реакциям. РИБТ положительна больше чем у 50 % больных. Третичная форма сифилиса практически не вызывает затруднений. Серологические реакции положительные в 50–90 % случаев. Диагностика скрытого серопозитивного сифилиса основывается на серологических реакциях с подтверждением результата с помощью РИБТ.

Источник: womanadvice.ru

Серологическая диагностика сифилиса

Серологическая диагностика 1

Диагностика сифилиса методами серологии позволяет обнаружить реакцию иммунитета человека в ответ на внедрение бактерии, тем самым, наличие антител будет говорить о заражении.

Трепонемы характеризуются сложным антигенным составом. В клеточной стенке бактерии расположены два липидных (липоидных) компонента, а также белковый и углеводный антигены. Эти антигены вызывают выработку различных классов антител в различные стадии сифилиса.

  1. Протеиновые антигены бледных трепонем считаются общими как для патогенной бактерии, так и для непатогенного их вида. Антитела IgM к ним вырабатываются довольно быстро: их можно обнаружить в сыворотке в течение первой недели от факта появления твёрдого шанкра.
  2. Полисахаридный антиген вызывает слабую продукцию антител, поэтому в серологической диагностике они малоинформативны.
  3. Липидные антигены являются объектом первоочередной скрининговой идентификации бледных трепонем. Антитела, вырабатывающиеся в ответ на липидный антиген называют реагинами или неспецифическими иммуноглобулинами.

С помощью серологических реакций в сыворотке крови обнаруживают антитела к различным антигенам.

Серологические тесты в диагностике сифилиса в особенности актуальны при идентификации скрытого (латентного) характера заболевания, его поздней стадии, также применяются для оценки успеха лечения больных.

В современной венерологии используются различные реакции: трепонемные и нетрепонемные тесты.

К нетрепонемным относят липидные реакции (реакция Вассермана, VDRL, RPR). Лабораторная диагностика сифилиса такими способами носит неспецифичный характер и используется для стартовой «отборочной» идентификации.

К трепонемным способам относят РИФ, РПГА, реакцию иммобилизации (РИБТ), ИФА. Тесты базируются на обнаружении специфичных антител в комплексе или отдельно (IgM и IgG).

Стандартными серологическими реакциями при идентификации трепонемы являются реакция Вассермана и её усовершенствованный вариант RPR, а также микропреципитация на стекле.

Нетрепонемные тесты: липидные или реагинные реакции

Реакции позволяют идентифицировать микроорганизмы по их липидному антигену. К ним относят:

  1. РСК – реакция связывания комплемента (реакция Вассермана).

В ответ на присутствие липидного антигена трепонемы в организме человека вырабатываются соответствующие антитела, которые связываются с антигеном и образуют в сыворотке крови иммунный комплекс. Через определённый фрагмент антитела с ним связывается один из факторов иммунной защиты – комплемент, т.е. происходит связывание иммунного комплекса с комплементом. Соответственно, если в организме бледных трепонем нет, то комплемент останется свободным.

Реакция Вассермана определяет наличие неспецифичных антител к микроорганизму. Для этого используются кардиолипиновый антиген животного или специально обработанный трепонемный антиген.

Для реакции применяется сыворотка крови животных, являющаяся источником комплемента. Для идентификации результата анализ дополняется индикаторами.

Серологическую диагностику сифилиса этим способом проводят в качественном и количественном вариантах:

  • Качественное исследование представляет собой определение наличия связи антител человека с липидным антигеном и комплементом. Положительный результат реакции Вассермана говорит о возможном заболевании. Результаты могут быть резкоположительными (++++), положительными (+++), слабоположительными (++), отрицательными.

Положительный результат не исключен после истечения 2-4 недель от факта появления шанкра.

  • Если результат положительный, то применяется количественный вариант исследования, а именно разведение сыворотки крови. Количественное определение антител также применяется для оценки успешности лечения больных. Если титр антител быстро снижается до негативных результатов, то это свидетельствует об успешности лечения. Самый значительный титр антител 1:160-1:320 наблюдается на вторичной стадии, а затем снижается до 1:80-1:120 в рецидивном вторичном периоде.
  1. Осадочные тесты (реакция преципитации).

Реакции базируются на осаждении иммунных комплексов «антиген-антитело» в виде помутнения. В ходе анализа к сыворотке пациента добавляют антиген микроорганизма и, если в ней есть антитела к Treponema pallidum, то анализ будет положительный.

  1. Микрореакции преципитации на стекле считаются методами экспресс-диагностики сифилиса.

Серологическая диагностика 2

Для такой диагностики сифилиса используются тесты VDRL, RPR, определяющие антитела. Эти реакции используются для выполнения массового скрининга.

  • VDRL — самая распространённая реакция экспресс-диагностики для выделения антител к липидному антигену. Анализ оценивают качественно (4+, 3+, 2+, отрицательно), а также количественно – в разведениях сыворотки с подсчётом титра реагинов.

Положительный результат фиксируется спустя 1-3 недели после возникновения первых симптомов и всегда позитивен во вторичном периоде. Сыворотку разводят в различных соотношениях и, если результат позитивен при разведении 1:8, то для подсчёта количества (титра) антител ставят тесты с серийными разведениями сыворотки. Выполняют анализ два раза с интервалом в 2 недели. Если титр антител увеличился в 4 раза, то результат интерпретируется как положительный.

  • RPR представляет собой современный усовершенствованный аналог реакции Вассермана. Данное экспресс-исследование подразумевает выявление неспецифичных антител против липидного антигена трепонемы.

С помощью нетрепонемных серологических реакций проводят скрининговое исследование для обнаружения инфекции:

  1. При беременности (анализ сдают 3 раза), донорстве, среди медицинских работников, работников сферы питания, учреждений образования, перед оперативными вмешательствами и при госпитализации.
  2. При подозрении на заболевание, если у пациента присутствуют подозрительные язвы, ИППП, при половых отношениях с больным сифилисом.
  3. При подозрении на врождённый сифилис.
  4. После завершения курса лечения больных от данной инфекции.

При врождённом сифилисе отмечают постепенное увеличение титра антител, а снижение их говорит о наличии материнских антител у ребёнка и отсутствии у него заболевания.

Если нетрепонемные тесты имеют отрицательные результаты, то данный вариант интерпретируют следующим образом:

  1. Заболевание отсутствует.
  2. Ранняя стадия болезни. Если от факта инфицирования бледной трепонемой прошло менее 2-5 недель, то выработанных антител в сыворотке против липидного антигена недостаточно для идентификации.
  3. Третичный период инфекции: антитела на липидный антиген продуцируются в небольшом количестве.
  4. В очень редких случаях регистрируются ложноотрицательные результаты, когда антитела в сыворотке содержатся в значительном количестве.

Для принятия окончательного решения выполняют трепонемные тесты.

В норме серологические тесты имеют негативные результаты.

Серологическая диагностика сифилиса в различные периоды инфекции имеет неодинаковую чувствительность:

  • В первичном периоде — 70-80%;
  • Во вторичном — 100%;
  • В третичном — 30-50%.

После завершения курса лечения все нетрепонемные методы (реакция Вассермана, VDRL, RPR) у больных должны быть негативные. В 90% анализы отрицательные.

Подготовка к сдаче крови:

  • Накануне исследования (за 12 часов) из питания следует исключить жирные продукты, алкоголь;
  • Последний приём пищи допускается за 8 часов до анализа.
  • Курение за 1 час до взятия крови исключается;
  • Сдают анализ строго натощак (можно выпить воду);
  • Непосредственно перед сдачей крови исключается физиотерапия, флюорография, рентгенография, УЗИ, стрессовые ситуации.

Диагностика сифилиса проводится путем исследования венозной крови, за исключением экспресс-метода (для анализа берут кровь из пальца).

Ложноположительные результаты при лабораторной диагностике сифилиса

Нетрепонемные тесты для обнаружения липидных антигенов иногда дают ложноположительные результаты.  Липидный антиген по своей структуре очень похож на некоторые клеточные компоненты у человека. При различных состояниях, когда возможна выработка аутоантител к собственным липидным структурам, результаты могут стать ложноположительными.

  • Беременность;
  • Пожилой возраст;
  • Наркомания (внутривенное введение);
  • Хронические инфекционные заболевания (вирусные гепатиты, туберкулёз, ВИЧ/СПИД, лепра, малярия);
  • Подагра;
  • Аутоиммунные заболевания (системная красная волчанка, склеродермия, системный васкулит, рассеянный склероз, синдром Гийена-Баре, ревматоидный артрит, тромбоцитопеническая пурпура, аутоиммунная нейтропения, синдром Шегрена, аутоиммунные поражения внутренних органов (тиреоидит, гепатит, колит, гломерулонефрит), некоторые кожные заболевания (псориаз, витилиго), сахарный диабет 1 типа и др.
  • При заболеваниях, вызванных другими видами трепонем (фрамбезии).

Ложноположительная реакция Вассермана характеризуется низким количеством антител (1:5-1:20), либо слабоположительным результатом (2+).

Для того, чтобы результаты анализов были достоверными, их используют сочетанно и проводят в динамике. После получения ложноположительного результата выполняют трепонемные тесты.

При анализе ликвора ложноположительные результаты регистрируются очень редко.

Трепонемные тесты и результаты

Анализы включают реакцию иммунофлюоресценции (РИФ), реакцию иммобилизации (РИБТ), реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) и иммуноферментный анализ (ИФА).

  1. РИФ становится позитивной раньше, чем реакция Вассермана. Это обусловлено более высокой специфичностью РИФ. В данном анализе также обнаруживают антитела в организме, вызванные бледной трепонемой, но антигеном выступают тканевые трепонемы, а не только их изолированный антиген. Препарат из бактерий располагают на предметных стёклах. Если в сыворотке крови есть антитела — они связываются с бактериями на стекле. Далее материал обрабатывают флуоресцирующей сывороткой и определяют свечение. По степени флуоресценции проводят оценку: если нет антител, то микроорганизмы не видны, а при присутствии, бактерии светятся (от 1+ до 4+).

Чувствительность РИФ:

  • Ранняя стадия – 80%;
  • Вторичный – 100%;
  • Третичный и скрытый период – 95-100%.
  1. РИБТ является дорогостоящим, но более специфичным анализом, чем РИФ. Реакция даёт положительный результат в 100% исследований. Реакция иммобилизации подразумевает поиск иммобилизинов – антител, которые обездвиживают бактерии. Живые бледные трепонемы выступают в качестве антигена при проведении исследования.

Для оценки подсчитывают количество бактерий, утративших способность двигаться:

  • РИБТ позитивна при утрате подвижности 51-100% бактерий;
  • Слабоположительный результат – 31-50%;
  • Сомнительные результаты – 21-30%;
  • Отрицательные – 0-20%.

Позитивные результаты РИБТ регистрируются позднее, чем при РИФ и реакции Вассермана. Исходя из этого, для особо заразительных периодов инфекции (первичный и вторичный), тест не выполняют.

Диагностика сифилиса с помощью РИБТ применяется в следующих ситуациях:

  • Подозрение на врождённый сифилис;
  • При третичной стадии;
  • При поражении внутренних органов;
  • Подозрение на нейросифилис;

Следует иметь ввиду, что диагностику сифилиса методом РИБТ проводят через 2-4 недели после лечения антибиотиками (в случае их применения), так как содержащиеся в крови антибактериальные вещества губительно повлияют на препарат и обеспечат ложноотрицательтный результат.

  1. РПГА определяет наличие специфичных антител IgG, IgM в комплексе. Для этого используются специальные эритроциты животных, на поверхности которых адсорбированы антигены трепонемы. К таким эритроцитам добавляют сыворотку больного. Если в ней содержатся антитрепонемные антитела, то результат будет положительный.

Диагностика сифилиса таким методом высокоспецифична (100%), но в первичный период обладает не весьма высокой чувствительностью (86%).

  1. ИФА позволяет определить количество антител различных классов (IgG, IgM), что позволяет оценить давность заболевания.
  • IgM – показатели свежего инфекционного процесса либо вторичного рецидивного периода. IgM начинают вырабатываться в организме через 4 недели от момента попадания трепонемы, а исчезают через 18 месяцев. Если первичный период начал поддаваться лечению сразу, то IgM элиминируются через 3-6 месяцев.
  • IgG свидетельствуют о давнем заражении, а также длительно сохраняются после лечения больных сифилисом.

Интерпретация ИФА

IgM IgG Интерпретация ИФА
Заболевания нет либо первичный серонегативный сифилис (пересдать через 2-4 недели).
+ Инфицирование произошло недавно, менее 4 недель назад.
+ + Разгар заболевания (первичный или вторичный период).
+ Период после успешного лечения либо давнее заражение.

 

В процессе лечения РИБТ, РИФ и РПГА негативируются очень медленно, за исключением случаев, когда терапия была начата рано (первичные период). В общей сложности трепонемные тесты для оценки эффективности лечения больных сифилисом не используются.

Интерпретация серологических реакций

Нетрепонемные тесты РИФ РПГА Интерпретация
+ Ложноположительный результат
+ + Первичный период
+ + + Любая стадия болезни или недавнее завершение лечения
+ Первичный период или ложноположительная РИФ
+ Вылеченный сифилис либо давно перенесенный
+ + Поздний период либо давно перенесенный
Заболевания нет либо первичный серонегативный период (требуется пересдать нетрепонемный тест через 2 недели)

Трепонемные тесты (РИБТ, РИФ, РПГА, ИФА) используются в следующих случаях:

  1. Положительный результат нетрепонемных методов лабораторной диагностики сифилиса. Если липидные реакции в сочетании с трепонемными тестами являются позитивными при отсутствии клинических симптомов – это считается основанием для установления диагноза сифилиса скрытого течения.

Если скрытое течение заболевания не удаётся подтвердить РИФ и РИБТ (при отсутствии лабораторной базы), то диагноз устанавливают на основании резкоположительной реакции Вассермана (4+) или других липидных реакций (VDRL, RPR). Исследование проводят 2 раза с интервалом 2 недели.

  1. Подозрение на ложноположительные результаты нетрепонемных тестов при наличии состояний и заболеваний, которые могут обеспечить такие результаты.
  2. Для установления диагноза сифилиса третичного периода при отрицательных липидных реакциях.
  3. Подозрение на первичный период при отрицательных нетрепонемных тестах и отрицательном микроскопическом исследовании отделяемого шанкра, лимфоузлов.
  4. Если человек состоит в длительном контакте с больным и имеет отрицательные результаты нетрепонемных тестов.
  5. При наличии высокого риска инфицирования бледной трепонемой и параллельном приёме антибактериальных средств по другим поводам, способствующим негативации реакции Вассермана.

Методы микроскопической диагностики первичного и вторичного сифилиса

К способам микроскопического обнаружения бледных трепонем относят:

  1. Исследование отделяемого шанкра на коже и слизистых оболочках.
  2. Биопсия лимфатического узла.

В процессе лабораторной диагностики сифилиса методом микроскопии используют нативный препарат, который исследуют в темном поле.

Приготовление нативного препарата:

  1. Язву или папулу обрабатывают тампоном, смоченным в физ.растворе. Затем просушивают.
  2. Поверхность язвы поглаживают бактериологической петлёй. Это приводит к отделению капли серозной жидкости через 1-2 минуты. Шанкр или папулу можно сдавить пальцами или создать вакуум с помощью бировской баночки.
  3. Полученный экссудат помещают на стекло и исследуют в тёмном поле микроскопа.
  4. Если трепонемы с первого раза обнаружить не удалось, как это часто случается, то больному назначают примочки с физ.раствором на 2 дня и повторяют исследование.

Пунктат из лимфоузла после биопсии сразу же исследуют под микроскопом. Если микроорганизмы обнаружить не удалось, исследование повторяют через 1-2 недели.

Диагностика сифилиса с помощью непосредственного обнаружения бактерий в пораженных тканях является самым достоверным способом идентификации заболевания.

Первичный и вторичный периоды сифилиса считаются самыми заразительными, т.к. количество бледных трепонем в отделяемом первичной и вторичной сифилом максимальное. Это послужило поводом для темнопольной микроскопии при подозрении на инфекцию. В гуммах при третичной стадии трепонемы обнаружить не удаётся.

Источник: prourologia.ru

  1. Журналы
  2. Клиническая дерматология и венерология
  3. # 6, 2015
  4. Современные лабораторные методы и алг…

Сифилис — системное инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum, subspecies pallidum), остается общемировой проблемой здравоохранения.

В Москве в последние годы отмечена стойкая тенденция к снижению заболеваемости сифилисом. В 2013 г. уровень заболеваемости сифилисом составил 20,4 на 100 000 населения. Однако эпидемиологическая ситуация продолжает оставаться напряженной: в структуре сифилиса преобладают скрытые формы, растет число поздних форм инфекции, что диктует необходимость усиления эпидемиологического контроля над распространением заболевания и широкого применения врачами-дерматовенерологами современных высокочувствительных и специфичных методов лабораторной диагностики сифилиса [1].

Все лабораторные методы диагностики сифилиса подразделяются на прямые, позволяющие выявлять возбудителя или его генетический материал непосредственно в очагах поражения, и непрямые — для выявления антител к возбудителю сифилиса в сыворотке крови (серологическая диагностика).

При назначении пациенту лабораторного обследования по поводу сифилиса не следует забывать о том, что абсолютным критерием постановки диагноза является непосредственное выявление возбудителя заболевания — бледной трепонемы (T. pallidum) или его генетического материала [2].

T. pallidum в образцах, полученных из райц-серума сифилидов или инфицированных лимфоузлов при раннем сифилисе, можно обнаружить с помощью следующих прямых методов исследования:

• микроскопия в темном поле микроскопа, или темнопольная микроскопия (ТПМ);

• прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) (для образцов из поражений в полости рта или из других очагов, где возможна контаминация трепонемами-комменсалами);

• полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Наиболее убедительным доказательством инфицирования сифилисом является прямая визуализация T. pallidum в темном поле зрения [3].

Материалом для темнопольной микроскопии является серозное отделяемое с поверхности эрозии, язвы, мацерированной или экскориированной, эрозированной папулы или бляшки, иногда — содержимое пунктата лимфоузла. При исследовании в темном поле бледная спирохета выглядит в виде нежной подвижной спирали, слабо светящейся серебристым блеском. Исследование в темном поле микроскопа позволяет изучать T. pallidum в живом виде, а также дифференцировать ее от других трепонем как по морфологическим признакам, так и по характерным особенностям движения, что позволяет поставить диагноз даже без учета данных серологических тестов.

Вторым методом выявления возбудителя сифилиса в очагах поражения является метод ПИФ. В результате взаимодействия моноклональных антител антиT. pallidum, меченных ФИТЦ, и бледной трепонемы, полученной из очагов поражения и помещенной на предметное стекло, при люминесцентной микроскопии наблюдается специфическое ярко-зеленое свечение. Метод удобен при исследовании материала, полученного со слизистой оболочки полости рта и прямой кишки, при биопсии или аутопсии. За счет использования видоспецифических моноклональных антител метод позволяет дифференцировать патогенную T. pallidum от трепонем-комменсалов [4]. В России данный метод не применяют ввиду отсутствия промышленного производства и сертификации соответствующих ингредиентов, в частности, моноклональных антител к патогенной бледной трепонеме, меченных ФИТЦ.

ПЦР позволяет обнаружить единственную молекулу ДНК возбудителя среди миллионов других молекул. Метод основан на принципе естественной репликации ДНК и заключается в размножении (амплификации) в пробирке определенных участков ДНК возбудителя в процессе повторяющихся температурных циклов. На каждом этапе вновь синтезированные молекулы копируются ферментом ДНК-полимеразой, благодаря чему происходит многократное удвоение специфических фрагментов ДНК [5].

Источниками обнаружения генетического материала возбудителя при постановке ПЦР у больных сифилисом могут являться: райц-серум (тканевая жидкость) генитальных язв, биопсийный материал кожных сифилидов, спинномозговая жидкость, амниотическая жидкость, плацента, периферическая кровь и семенная жидкость. Наиболее адекватным для исследования является райц-серум генитальных язв.

Чувствительность и специфичность метода ПЦР при исследовании райц-серума сифилидов при первичном сифилисе достигает 94,7—98,6%, при вторичном 80—98,6% и более выражена по сравнению с темнопольной микроскопией [6].

Широкое применение при обследовании на сифилис получили непрямые, серологические методы исследования, принцип которых заключается в выявлении в сыворотке или плазме крови или спинномозговой жидкости пациентов антител, ассоциированных с сифилитической инфекцией.

Первой серологической реакцией для диагностики сифилиса была реакция связывания комплемента, предложенная в 1906 г. Вассерманом, Нейсcером и Бруком [7]. Однако в настоящее время этот метод, ставший в свое время революционным и положивший начало серологической диагностике сифилиса, считается морально устаревшим: он длительно выполняется, субъективно интерпретируется, часто дает ложноотрицательные и ложноположительные результаты и не подлежит стандартизации.

Современные серологические тесты, применяемые для диагностики сифилиса, подразделяются на две большие группы: нетрепонемные (НТТ) и трепонемные (ТТ).

В НТТ на сифилис используется антиген нетрепонемного происхождения — кардиолипин-холестерол-лецитиновый комплекс [8, 9].

Основными видами НТТ, рекомендуемыми к применению на территории России, в настоящее время являются:

— РМП — реакция микропреципитации с плазмой и инактивированной сывороткой;

— RPR — тест быстрых плазменных реагинов (Rapid Plasma Reagins), или быстрый, или ускоренный плазмареагиновый тест;

— VDRL (Venereal Disease Research Laboratory) — тест исследовательской лаборатории венерических заболеваний.

Могут быть также использованы следующие их аналоги при условии, если тест-система имеет разрешение к медицинскому применению на территории Российской Федерации:

TRUST — тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой (Toluidin Red Unheated Serum Test);

RST — тест на скрининг реагинов (Reagin Screen Test);

USR — тест на реагины с непрогретой сывороткой (Unheated Serum Reagins) [10, 11].

Показаниями к применению НТТ на сифилис являются:

• проведение скрининга населения на сифилис;

• контроль эффективности терапии (по титру антител в парных сыворотках, полученных до и после лечения);

• определение активности инфекции (по высоте титра антител).

НТТ просты в исполнении, недороги, не требуют специального оборудования и длительного времени; при этом реакции являются высоко чувствительными и специфичными.

Чувствительность РМП варьирует в зависимости от стадии заболевания: от 81% при первичном сифилисе до 94—99% при вторичном и скрытых формах сифилиса. Чувствительность зарубежных тестов варьирует от 59 до 100%, специфичность — от 93 до 99%.

После адекватного специфического лечения сифилиса содержание антител к возбудителю сифилиса, выявляемых в НТТ, постепенно снижается, тесты из резко положительных становятся слабоположительными, а затем отрицательными. В связи с этим НТТ используют для оценки эффективности лечения.

Ограничениями применения НТТ являются ранние стадии сифилиса (период инкубации, начало первичного периода), так как данные реакции становятся позитивными лишь спустя 2—3 нед после появления твердого шанкра, и поздние стадии (поздний скрытый и третичный сифилис, сифилис с поражением внутренних органов и нервной системы), так как лабильные преципитины первыми элиминируются из организма при длительном течении сифилитической инфекции. К числу недостатков НТТ следует отнести также субъективный визуальный учет, хотя в настоящее время разработаны системы для видеоцифровой регистрации результатов с их переводом в цифровые данные.

Следует иметь в виду, что антитела, определяемые в НТТ на сифилис, могут выявляться при ряде острых и хронических инфекционных и соматических заболеваний, которые сопровождаются гибелью клеток и разрушением тканей, что может стать причиной ложноположительных результатов НТТ, которые встречаются при скрининге населения на сифилис в 1—3% случаев [12].

В ТТ применяется антиген трепонемного происхождения — патогенная бледная трепонема, рекомбинантные белки, полученные генно-инженерным способом или пептиды, полученные путем искусственного химического синтеза.

Основными ТТ, рекомендуемыми к применению на территории России, в настоящее время являются:

ИФА — иммуноферментный анализ (ELISA — Enzymelynced immunosorbent assay, EIA – Enzyme immunoassay);

РПГА — реакция пассивной гемагглютинации (ТРНА, TPPA — Treponema pallidum hemagglutination assay, Treponema pallidum partiсle agglutination assay);

РИФ — реакция иммунофлюоресценции (FTA Fluorescent treponemal antibody);

Иммуноблоттинг (Immunoblotting);

ИХЛ — иммунохемилюминесценция (СLIA — Chemiluminescence Immunoassay);

Простые быстрые тесты у постели больного — ПБТ (РОС — point of care tests);

РИБТ (РИТ) — реакция иммобилизации бледных трепонем (TPI — Treponema pallidum immobilization test) [13, 14].

Показаниями к применению ТТ являются:

• подтверждение положительных результатов НТТ;

• дополнительное подтверждение в случае расхождения результатов скринингового ТТ и последующего НТТ;

• скрининг населения на сифилис (ИФА, РПГА, простые быстрые тесты).

К числу несомненных достоинств ТТ относится их высокая чувствительность и особенно специфичность, возможность подтверждения (верификация) результатов НТТ.

Часть ТТ (ИФА, ИХЛ, иммуноблоттинг) может быть автоматизирована и выполняться на анализаторах с получением объективного отчета в электронном виде. Для РПГА имеется возможность видеоцифровой регистрации результатов.

ТТ могут быть использованы для подтверждения клинического диагноза сифилиса на ранних стадиях инфекции, когда НТТ еще отрицательны, но есть клинические, эпидемиологические или анамнестические подозрения на сифилис. Однако чувствительность при первичном сифилисе этих тестов в совокупности недостаточна (76—86%) в основном за счет РИБТ, которая становится позитивной, начиная со второй половины первичного периода сифилиса.

Ранние стадии сифилиса (начало первичного периода сифилиса, период инкубации) могут быть диагностированы при использовании IgM-тестов, которые выявляют ранние трепонемоспецифические IgM, первыми появляющимися в организме больного сифилисом в ответ на внедрение возбудителя (варианты РИФ-абс IgM, ИФА-IgM, ИХЛ-IgM, IgM-иммуноблоттинга) [15—19].

Трепонемные методы хорошо выявляют вторичный и скрытый сифилис (чувствительность составляет 98—100%) [20].

ТТ могут быть использованы для установления ретроспективного диагноза сифилиса, а также для распознавания ложноположительных результатов НТТ.

С использованием ряда ТТ (ИФА, РПГА, ИХЛ, ПБТ) можно проводить скрининг отдельных категорий населения на сифилис (доноры, беременные, больные офтальмологических, психоневрологических, кардиологических стационаров, ВИЧ-инфицированные).

ТТ не могут быть использованы для контроля эффективности лечения, так как длительно остаются положительными после окончания лечения сифилиса (в особенности РИБТ, РПГА). Они сложнее в техническом отношении, чем НТТ, что несколько ограничивает их применение.

В настоящее время существуют два основных подхода к проведению скрининга и обследования больных на сифилис: первый подход характеризуется началом обследования с назначения НТТ, второй — когда обследование начинается с ТТ.

В соответствии с первым алгоритмом, первичное обследование пациента с подозрением на сифилис проводится с помощью НТТ — РМП или ее модификации (качественная, полуколичественная) (рис. 1). При отрицательном результате НТТ делается вывод о том, что «антитела к возбудителю сифилиса не выявлены». Исследование может быть сделано повторно через 2—3 нед по эпидемическим показаниям (в случае подозрения на заражение сифилисом).

Лабораторная диагностика сифилитической инфекции
Рис. 1. Традиционный алгоритм серологического скрининга на сифилис (из лекции Фриго Н.В. на цикле усовершенствования врачей, РМАПО, 2012).

При положительном результате НТТ ставится любой подтверждающий ТТ. В случае положительного результата тестирования делается вывод о том, что у пациента «антитела к возбудителю сифилиса выявлены» и имеется сифилис в настоящем или сифилис, перенесенный в прошлом. При отрицательном значении ТТ делается вывод о ложноположительных результатах НТТ.

Контрольное обследование после лечения проводится с помощью РМП или ее модификации в полуколичественном варианте. По снижению ее титра судят об эффективности терапии

Заключительное обследование проводят не ранее чем через 1 год. Ставится та же специфическая реакция, что и при первичном обследовании. Наличие ее положительных результатов не является препятствием для снятия пациента с учета [13].

Приведенный алгоритм получил название «традиционного», в отличие от «реверсионного» алгоритма, активно используемого в настоящее время за рубежом и в России.

Традиционный алгоритм скрининга на сифилис имеет свои преимущества и недостатки. Несомненным преимуществом является то, что он выявляет активную инфекцию. Однако данный алгоритм дает высокий процент ложноположительных результатов, нуждается в подтверждении ТТ и может пропустить ранний первичный сифилис или пролеченную инфекцию.

В отличие от традиционного, реверсионный алгоритм скрининга начинается с использования ТТ (обычно ИФА, например, в США; Европе также используют ИХЛ). Термин «реверсионный» начал использоваться применительно к данному алгоритму в начале XXI века [21—23]. Родоначальниками данного алгоритма стали английские ученые Эгглстоун и Тернер. В несколько упрощенном виде в настоящее время данный алгоритм выглядит следующим образом (рис. 2).

Лабораторная диагностика сифилитической инфекции
Рис. 2. Реверсионный алгоритм серологического скрининга на сифилис (из лекции Фриго Н.В. на цикле усовершенствования врачей, РМАПО, 2012).

При получении отрицательного результата ТТ (например, ИФА) делается вывод о том, что у человека «антитела к возбудителю сифилиса не выявлены». Повторное исследование с использованием ТТ может быть проведено по эпидемиологическим показаниям (при подозрении на возможность заражения сифилисом) через 2—3 нед.

При положительном результате ТТ следует постановка НТТ с определением титра антител.

Если НТТ дает отрицательный результат, проводится дополнительное тестирование с использованием второго чувствительного и специфичного (подтверждающего) ТТ (например, РПГА).

При отрицательном результате дополнительного подтверждающего теста (РПГА–) делается вывод о том, что человек не болен сифилисом; при этом положительный результат скринингового ТТ (первый) расценивается как ложноположительный.

При положительном результате (РПГА+) делается вывод о том, что у человека имеется сифилис в настоящем или был перенесен в прошлом.

Можно привести ряд аргументов в пользу использования реверсионного алгоритма:

• возможность автоматизации ТТ;

• высокая производительность (до 180 тестов в час);

• отсутствие или сведение до минимума ручных манипуляций (безопасность персонала и высокое качество исследований);

• низкая себестоимость при больших объемах тестирования (поток);

• отсутствие ложнонегативных реакций и феномена прозоны (высокая чувствительность);

• объективные результаты;

• возможность детекции IgM антител — потенциальная возможность диагностики раннего сифилиса.

Главным преимуществом реверсионного алгоритма является то, что он выявляет ранний или пролеченный сифилис, что может быть пропущено при традиционном скрининге. Вместе с тем он также имеет ряд недостатков: реверсионный алгоритм нуждается в постановке НТТ для подтверждения активной инфекции и контроля эффективности терапии, может давать ложноположительные результаты (из-за недостаточно высокой специфичности тестов), не позволяет дифференцировать активную и пролеченную инфекцию (и это его основной недостаток!).

Проблемы возникают чаще всего при наличии положительного результата ТТ и отрицательного результата НТТ. Тактика в этом случае должна быть следующей.

• При несовпадении результатов скринингового ТТ и НТТ (ТТ+, НТТ–) необходима постановка дополнительного подтверждающего ТТ.

• Подтверждающий Т.Т. должен иметь чувствительность не ниже, а специфичность — выше, чем скрининговый ТТ.

• В качестве дополнительного подтверждающего теста в этих случаях может быть рекомендована РПГА (РИФабс не рекомендуется ввиду более низкой аналитической чувствительности в сравнении с другими ТТ) [24].

• Результаты скрининга следует анализировать с учетом клинической картины заболевания и анамнестических данных пациентов (в частности, полноты и качества проведенного специфического лечения по поводу ранее перенесенного сифилиса).

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что в распоряжении дерматовенерологов и врачей других специальностей в настоящее время имеется большой арсенал как прямых, так и непрямых лабораторных методов исследования для диагностики сифилиса. Рациональное использование имеющихся технологий и алгоритмов диагностики позволяет осуществлять эпидемиологический надзор и контроль над распространением сифилиса на территории города Москвы и других субъектов Российской Федерации.

Конфликт интересов отсутствует.

Источник: www.mediasphera.ru

Лабораторная диагностика сифилитической инфекции

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.