Холера, которую вызывает холерный вибрион, входит в список самых опасных болезней человечества. Она известна издревле, протекает в виде эпидемий и уносит миллионы жизней. Очагом холеры была Индия – идеальный по температуре и влажности для бактерии Vibriocholera климат. Специфика региона – высокая плотность населения при низкой санитарно-гигиенической культуре, загрязнении водоемов фекалиями, использовании инфицированной воды в пищу – объясняет факт развития инфекции в данном месте. Как и другие инфекционные болезни, холеру изучают микробиологическими методами.

История обнаружения микроба

Холера с древних времен известна человечеству. Ее упоминал в своих работах Гиппократ, а первое научное описание эпидемии холеры сделал португальский врач Гарсиа дель Хуэрто в 1563 г. (Индия, Гоа).

В 1885 г. Кох выделил чистую культуру бактерии Vibriocholera. И хотя Хуэрто еще в 1563 г. описал холеру как болезнь, только с появлением микроскопов появилась возможность выявить возбудитель. Микробиологические исследования показали, что возбудителями холеры являются микроорганизмы в форме изогнутой палочки, получившие название «холерный вибрион». В 1870 г. Луи Пастер подтвердил влияние ослабленных бактерий на формирование иммунитета на примере эксперимента с куриной холерой. Это подтолкнуло его к открытию способа получения вакцин.

Возбудитель холеры: виды и значения

С развитием микробиологии ученые выявили причину холеры. Ею оказался микроорганизм, согласно принятой классификации, относящийся к царству прокариотов, типу Протеобактерий, порядку Vibrionales, семейству Vibrionaceae, роду Vibrio и виду Vibriocholera – холерный вибрион.

Холерный вибрион (латинское название Vibriocholera) – слабоизогнутая грамотрицательная палочка с выраженным полиморфизмом, определяющим ее морфологическую изменчивость. Бактерия очень подвижна (монотрих), не образует споры и капсулы. Возбудитель холеры относится к группе хемоорганогетеротрофов и является факультативным анаэробом.

Бактерия холеры имеет термолабильный О- и термостабильный жгутиковый Н-антигены. О-антигены по особенностям строения подразделяют на 140 серогрупп. Среди всех V.cholerae только вибрионы серогрупп О1 и О139 вызывают холеру. Бактерии, входящие в другие серогруппы, являются условнопатогенными (О2, О3 и О4 вызывают гастроэнтериты и энтериты) или непатогенными.

По разновидности штаммов бактерий, входящих в О1, биовары подразделяют на:

  • классическую холеру с типичным протеканием заболевания;
  • биотип холерного вибриона Эль-Тор, для которого характерно легкое и нетипичное протекание болезни.

Биотипы серогруппы О1 по наличию в составе фракций А, В и С разделяют на три серовара (серотипа):

  • Огава содержит фракцию В;
  • Инаби– фракцию С;
  • Хикодзима – носитель фракций А, В и С.

Серовар Хикодзима не является общепризнанным, и его наличие оспаривается рядом ученых. Термостабильный Н-антиген (жгутиковый) вибрионов холеры является общим для всех серотипов. Бактерии холеры, входящие в серогруппы non О1, способны вызвать диарею различной тяжести, вплоть до летального исхода.

Строение

Морфология холерного вибриона описывает строение и форму бактерии. Бактерия Vibriocholera под микроскопом выглядит как прямая или изогнутая палочка с одним жгутиком, длина которого значительно превышает размеры самого вибриона (1,5/4 х 0,2/04 мкм). В стационарной фазе роста (старая культура) вибрион имеет инволюционные формы:

  • нитевидные;
  • спиралевидные;
  • колбовидные;
  • кокковидные.

При воздействии пенициллина бактерия образует фильтрующиеся формы. На свежих средах, при пересеве, Vibriocholera возвращается к первоначальному виду изогнутой палочки.

Жизненный цикл и питание

Возбудитель холеры относят к факультативным анаэробам, но лучший рост бактерий происходит при аэробных условиях. По типу питания бактерию Vibriocholera относят к хемоорганотрофам с типичными окислительными и бродильными типами метаболизма. Хемотрофы получают энергию из окислительно-восстановительных (ОВ) процессов и, как многие другие патогенные микроорганизмы, не зависят от солнечной энергии. Холерный вибрион является факультативным анаэробом, то есть процессы окисления-восстановления происходят без участия кислорода по типу брожения.

Органотрофы в ОВ-реакциях взаимодействуют с органическими соединениями, расщепляя их на более простые и устойчивые соединения. Чаще всего донорами в ОВ-процессах являются сахара, жиры и аминокислоты. В пищевой цепочке возбудитель холеры является консументом – он использует уже готовые органические соединения, но не способен разложить их до простейших неорганических составляющих.

Гетеротрофы, к которым относится бактерия холеры, получает необходимый для жизнедеятельности клетки углерод из имеющихся органических соединений. Она не способна усваивать его из углекислого газа. Все гетеротрофы делятся на такие группы:

  • симбионты – взаимовыгодно сосуществующие с другим видом;
  • паразиты – бактерии, к которым относится холерный вибрион, живущие за счет хозяина и приносящие ему вред;
  • сапрофиты – микроорганизмы, использующие для питания мертвую органику.

Путь вибриона в организме

Бактерии холеры попадают в организм человека из окружающей среды вместе с водой и пищей. В желудке большая часть микроорганизмов погибает под воздействием соляной кислоты. Возбудители холеры, преодолевшие кислотный барьер желудка, проникают в тонкий кишечник. Щелочная среда кишечника благоприятна для жизнедеятельности вибрионов. Микроорганизмы прикрепляются к слизистой оболочке кишечника. Вибрион не проникает внутрь клеток кишечника – он остается снаружи.

В процессе жизнедеятельности холерные вибрионы выделяют специфический токсин СТХ, взаимодействие которого с клеточной оболочкой вызывает функциональные нарушения. Внутри клетки происходит нарушение обмена таких веществ, как натрий и хлор, следствием чего является выделение растворенных солей в просвет кишечника и быстрое обезвоживание организма. Обезвоженные клетки слизистой кишечника быстро погибают и выводятся из организма вместе с бактериями – возбудителями заболевания.

Биохимические свойства

Возбудитель холеры обладает высокой биохимической активностью. Сахаролитические свойства:

  • сбраживают глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннит до кислоты;
  • не окисляют арабинозу, инулин, инозит.

Отношение к сахарам является критерием для деления вибрионов на 6 групп. Для определения сахаролитической активности применяется «триада Хейберга» – сахароза, манноза и арабиноза. Истинные возбудители холеры относятся только к первой группе, окисляющей маннозу и сахарозу, и инертные к арабинозе. В другие пять групп входят нехолерные вибрионы.

Протеолитические свойства:

  • разжижают желатин;
  • вызывают свертываемость плазмы крови кролика;
  • гидролизуют казеин;
  • разжижают свернувшееся молоко;
  • расщепляют белковые соединения до аммиака и индола;
  • нитраты восстанавливают в нитриты;
  • не образуют сероводород.

Холерный вибрион продуцирует оксидазу, которая является катализатором ОВ-процессов в клетке.

Устойчивость

Для бактерии Vibriocholerae окружающая среда не является благоприятной – воздействие прямых солнечных лучей или высушивание для микроорганизма губительно. Высокие температуры возбудитель холеры тоже не переносит:

  • при 60°С он погибает в течение 5 минут;
  • при 100°С практически мгновенно.

Низкие температуры и замораживание для холерного вибриона не критичны, он способен несколько дней сохранять свою жизнеспособность даже вмороженным в лед. Кислая среда для бактерии холеры губительна. В растворе серной кислоты даже крайне разбавленной концентрации (1:10000) вибрион холеры погибает за несколько секунд. Щелочная среда (как в кишечнике, где микроорганизмы обитают) и высокие концентрации солей для Vibriocholerae являются вполне благоприятными.

Антигенная структура

Вибрион холеры содержит 2 антигена:

  • Н – жгутиковый термолабильный, неспецифический, общий для всех вибрионов;
  • О – соматический термостабильный, обладает видовой специфичностью, делит вибрионы на 140 серогрупп. Так, биовары Vibriocholerae классической холеры и биотип Эль-тор относятся к подгруппе О1.

Подгруппа О1, в зависимости от входящей в состав фракции А, И и С, делится на 3 серовара:

  • Огава;
  • Инаба;
  • Хикодзима.

У носителей и больных обнаружили подобные холерному вибриону формы, не обладающие антигенами О и Н. Их назвали НАГ-вибрионами, и достаточно часто выделяют из различных объектов окружающей среды, в частности, из воды.

Патогенность

Холерный вибрион попадает в организм человека и в большей части гибнет в желудке с его кислой средой. Вибрионы, проскочившие желудок, попадают в тонкий кишечник, где среда щелочная. В нем бактерии холеры проникают через слизистую оболочку стенок и прикрепляются к энтероцитам.

Основной фактор патогенности бактерии холеры – это секреция белковых эндо- и экзотоксинов. К экзотоксинам относится холероген, состоящий из двух субъединиц (А и В) и являющийся функциональным блокатором. Субъединица А является источником токсических свойств. Она провоцирует выработку аденилатциклазы, что приводит к нарушению водно-солевого баланса, выведению солей натрия и хлора и быстрому обезвоживанию организма больного. Субъединица В вырабатывает эндотоксин, который входит в состав клеточной стенки и защищает вибрион холеры от фагоцитов.

Тинкториальные свойства холерного вибриона

Являясь грамотрицательными микроорганизмами, бактерии холеры окрашиваются по Граму в красный цвет.

Токсины

В процессе жизнедеятельности холерный вибрион продуцирует два вида токсинов:

  • экзотоксин холероген, обладает ярко выраженным энтеротоксическим действием;
  • эндотоксин.

Возбудители холеры в организме человека продуцируют фибринолизин, коллагеназу, лерициназу, муциназу, нейраминедазу, которые называют ферментами агрессии.

Выращивание и лабораторная диагностика

Вибрионы Vibriocholera являются факультативными анаэробами, они хорошо растут на щелочных средах с pH от 7,3 до 8,7.

  1. Плотные среды. При культивировании холерных вибрионов на плотных средах получаются дискообразные колонии с ровными краями, почти прозрачные, с легким голубым оттенком.
  2. Желатин. Выращенные на желатине вибрионы формируют зернистые прозрачные колонии, под микроскопом напоминают битые стекла.
  3. Щелочной бульон. На пептонной воде и щелочном бульоне выращивают холерный вибрион в виде пленки. Бактерии Vibriocholera вызывают острую карантинную инфекцию, и требования к забору материала для лабораторных исследований учитывают возможную высокую заразность образцов. С учетом этого бактериологические исследования образцов с подозрением на холеру следует проводить только в режимных лабораториях, укомплектованных специально обученным персоналом.

Лабораторная диагностика образцов проводится следующими методами:

  • бактериоскопический;
  • бактериологический;
  • серологический.

Бактериологические исследования проводят поэтапно, с максимально короткими интервалами между анализами. Данные исследования проводятся в режиме круглосуточной работы.

  1. Этап 1. Делается посев исследуемого материала на пептонной воде 1%; пептонной воде 1% с теллуритом калия; щелочном МПА; селективной среде.
  2. Этап 2. Спустя 7-8 ч. после посева изучают рост микроорганизмов образца. Интенсивно растущие в щелочной среде холерные вибрионы опережают сопутствующую микрофлору и образуют на поверхности нежно-голубую прозрачную пленку. Полученную пленку, для дальнейшего накопления микроорганизмов, засевают на пептонную воду 1% и щелочной агар. Также проводят реакцию с диагностической сывороткой.
  3. Этап 3. Посевы выдерживают в термостатах 12-14 ч. С полученными микроорганизмами проводят реакцию агглютинации с использованием О-сыворотки. При положительном результате полученный материал высевают на среду (чаще всего полиуглеводную), содержащую 2-3 сахара для получения чистой культуры. На этом этапе, спустя 48 ч. с момента получения образца для исследования, выдается ответ о наличии вибриона холеры в исследуемом образце.
  4. Этап 4. Материал термостатируется в течении 12-14 ч. За счет расщепления сахаров цвет столбика изменяется. Проводят идентификацию культуры по характерным морфологическим, антигенным и другим свойствам. На данном этапе проводят дифференциацию классической холеры и Эль-Тора. Для чего используют рот-тест, пестрый ряд Гисса, реакцию Фогеса-Проскауэра, гексминовый тест и другие специфические методики. Спустя 60 ч. после начала исследований определяется вирулентность изучаемых образцов.

Серологический метод:

  1. Реакция агглютинации культуры холерного вибриона, выращенной на агаре в течение 5 часов, и сыворотки больного.
  2. Применение ИФА-методов для обнаружения копроантител.

Существуют ускоренные методы, к которым относятся:

  • исследование реакций микроагглютинации и иммобилизации вибрионов с противохолерной О-сывороткой на фазовоконтрастном микроскопе;
  • иммунофлюоресцентный метод;
  • ПЦР-диагностика.

Эпидемиология

Холерный вибрион вызывает острую кишечную инфекцию, а единственным источником инфекции в природе может быть только больной человек или бактерионоситель. Животные не болеют холерой, а при искусственном заражении сразу погибают.

При биоваре холеры Эль-Тор возможно продолжительное вибрионосительство, кроме того, заболевание протекает по атипическим формам, затрудняя своевременную диагностику и способствуя распространению инфекции.

Инфекция может попадать в организм человека по следующим путям заражения:

  • водный – при употреблении или использовании в хозяйственных целях инфицированной воды;
  • пищевой – с инфицированными продуктами (молоко, моллюски, рыба);
  • контактный – через предметы или прямой контакт с больным;
  • смешанный – представляет сочетание предыдущих путей заражения.

Заразиться холерой воздушно-капельным путем через органы дыхания маловероятно.

Особенности болезни

Заболевание относится к особо опасным заболеваниям с высокой восприимчивостью. Чаще всего распространяется в форме эпидемий. Скрытый (инкубационный) период может длиться от нескольких часов до 5 суток. У человека заболевание может протекать от стертой до тяжелой формы с летальным исходом через сутки-двое.

До 80% случаев инфицирования холерным вибрионом протекает как заболевание легкой или средней степени тяжести, сопровождающееся диареей. Возбудитель заболевания, попав в организм человека через рот, локализуются в организме больного на поверхности ворсинок тонкого кишечника, в просвете кишечника.

Симптомы холеры

Независимо от степени тяжести заболевания, холера обладает двумя выраженными симптомами:

  1. Диарея. Под воздействием эндотоксина холерного вибриона происходит отек слизистой оболочки кишечника. Нарушается водно-солевой баланс, и организм начинает выделять жидкость и растворы солей. Это приводит к быстрому обезвоживанию организма.
  2. Рвота. Выделяемая тонким кишечником жидкость и растворы солей поднимаются по ЖКТ вверх и удаляются через рот.

Группа риска

Наиболее подвержены инфицированию следующие категории людей:

  • имеющие низкую кислотность желудка;
  • зараженные глистами;
  • после резекции желудка;
  • с ослабленной иммунной системой;
  • с анемией;
  • алкоголики.

Осложнения

При поражении холерным вибрионом наблюдаются два вида осложнений, связанные с потерей организмом жидкостей и минералов:

  • неспецифические;
  • специфические.

К неспецифическим относят пневмонии, флегмону, сепсис, рожу и абсцессы. Специфические осложнения связаны с патологиями тонкого кишечника на фоне потери жидкости – часто это дифтерический колит. Возможны увеличение селезенки, тромбоз междольковых сосудов печени, некроз эпителия почечных канальцев, постхолерная уремия и другие.

Лечение

Лечебные мероприятия в первую очередь направлены на восполнение и восстановление водно-солевого баланса. Регидратация проводится внутривенно струйно, далее капельно. Вводят раствор хлорида и гидрокарбоната натрия в бидистилляте.

Совместно с регидратационной терапией применяют антибиотики – олететрин, тетрациклин, эритромицин, левомицетин. Применяются сульфаниламидные препараты, витамины группы В, С и РР. Благодаря использованию комплексного лечения летальность холеры на сегодняшний день составляет около 1%.

Иммунитет у переболевших

После перенесения инфекции стойкий иммунитет при холере не создается. Повторное заражение возможно, а эффективную вакцину создать пока не удается.

Источник: probakterii.ru

Род Vibrio.

Семейство Vibrionaceae объединяет подвижные, изогнутые палочковидные бактерии, обладающие полярными жгутиками. Эволюционно происходят из водных бактерий, широко распространены в пресной и морской воде, у беспозвоночных и позвоночных хозяев. Патогенные для человека виды относят к родам Vibrio, Aeromonas и Plesiomonas.

Для рода Vibrio характерны короткие прямые или изогнутые грамотрицательные палочки, подвижные, не образующие спор и капсул, хорошо растущие на обычных средах. Они ферментируют углеводы с образованием кислоты без газа, чувствительны к вибриостатику О/129. Можно культивировать при температуре от плюс 18 до 37оС, рН 8,6-9,0.

От других родов семейства представители рода Vibrio дифференцируют по биохимическим тестам. Род насчитывает более 25 видов, из них основное значение имеет Vibrio cholerae- возбудитель холеры, а также V.parahaemolyticum, V.vulnificus.

Vibrio cholerae.

Морфология.Холерный вибрион имеет один полярный жгутик, часто напоминает запятую (запятая Коха). Важный диагностический признак — подвижность (определяют микроскопией по методу висячей или раздавленной капли). Морфологически изменчивы. Хорошо окрашиваются водным фуксином Пффейфера и карболовым фуксином Циля.

Культуральные свойства.Факультативный анаэроб. Холерный вибрион неприхотлив к питательным средам. Хорошо размножается на 1% щелочной (рН 8,6-9,0) пептонной воде, опережая бактерии кишечной группы (среда обогащения), образует нежную голубоватую пленку и муть. Для подавления роста протея и некоторых других микроорганизмов используют пептонную воду с добавлением теллурита калия.

На плотных средах холерный вибрион образует гладкие стекловидные, прозрачные с голубоватым оттенком дисковидные колонии вязкой консистенции. Используют щелочной агар, желчно — солевой агар, щелочной агар с кровью, наилучшей является TCBS — агар (агар с тиосульфатом, цитратом, солями желчных кислот и сахарозой).

Биохимические свойства.Холерный вибрион сбраживает с образованием кислоты без газа многие углеводы (глюкозу, сахарозу, маннозу, маннит, лактозу, левулезу, гликоген, крахмал). По отношению к трем сахарам (триада Хейберга) — сахарозе, маннозе и арабинозе вибрионы делят на восемь биохимических групп, холерный вибрион относится к первой группе (разлагает сахарозу и маннозу).

Холерный вибрион разлагает желатин, казеин, свертывает молоко и разлагает белковые препараты до индола и аммиака.

Вид V.cholerae делят на биотипы, серогруппы и серовары.. Основные биотипы — классический (V.cholerae asiaticae) и Эль — Тор (V.cholerae eltor). Серогруппы выделяют по структуре О- антигенов, в основной О1 группе холерных вибрионов выделяют серовары Огава, Инаба и Хикоджима.

Антигенная структура.У холерных вибрионов выделяют термостабильные О- антигены и термолабильные Н- антигены. По структуре О- антигенов выделено 139 серогрупп, биотипы Эль — Тор и классический объединены в 01 группу (типируются 01 — антисывороткой). Изоляты Эль — Тор отличаются гемолитическими свойствами (вызывают гемолиз эритроцитов барана), способностью агглютинировать куриные эритроциты, резистентности к полимиксину, чувствительности к фагам.

О- антиген 01 группы неоднороден и включает общий А- компонент и два типоспецифических — В и С. Соответственно их наличию серовар Огава имеет сочетание АВ, Инаба — АС, Хикоджима — АВС.

Холерный вибрион может переходить из S- в R- форму, не агглютинироваться О- сывороткой. В связи с антигенной структурой для идентификации V.cholerae используют О- сыворотку, OR- сыворотку ( для выявления OR- и R- диссоциантов), типоспецифические сыворотки Инаба (С) и Огава (В). В 90- е годы выявлен новый серовар V.cholerae 0139, не агглютинирующийся вышеуказанными сыворотками, по остальным свойствам мало отличающийся от холерного вибриона 01 группы.

Не типируемые основной 01 сывороткой (т.е. не относящиеся к 01 группе) вибрионы называются неагглютинирующими (НАГ) вибрионами- холероподобными или парахолерными. Они имеют общий с холерным вибрионом Н- антиген, но отличаются по О- антигену.

По Н- антигену выделяют группы А и В, холерные вибрионы входят в группу А. Вирионы группы В (биохимически отличающиеся от холерных) имеют неоднородную структуру О- антигена и подразделяются на шесть серологических подгрупп.

Факторы патогенности холерного вибриона.

1. Подвижность(жгутики) ихемотаксис.

2. Ферменты способствуют адгезии и колонизации, взаимодействию с эпителиальными клетками- муциназа (разжижает слизь), нейтаминидаза (взаимодействие с микроворсинками, создание посадочной площадки), лецитиназа и другие.

3. Эндотоксин— термостабильный липополисахарид, схожий по структуре и свойствам с другими эндотоксинами грамотрицательных бактерий.

4. Экзотоксин — холероген — главный фактор патогенности, термолабильный белок. Синтез холерогена — важнейшее, генетически детерминированное свойство холерного вибриона. Молекула холерогена состоит из двух фрагментов А и В. Собственно токсическую функцию выполняет пептид А1 фрагмента А. Молекула холерогена распознает рецептор энтероцита, проникает в мембрану клетки, активирует аденилатциклазную систему, накапливающийся циклический АМФ вызывает гиперсекрецию жидкости, Na+, HCO3, K+, Clиз энтероцитов. Это приводит к характерной для холеры диарее, обезвоживанию и обессоливанию организма.

5. У многих вибрионов, в т.ч. не относящихся к 01 группе, имеются различные энтеротоксины.

6. В патогенезе проявлений холеры имеет значение также фактор, повышающий проницаемость капилляров.

Некоторые особенности эпидемиологии.Холера — кишечная инфекция. Основной источник — человек (больной или вибрионоситель), загрязненная вода. Способ заражения — фекально — оральный. Индивидуальная восприимчивость к холере чрезвычайно вариабельна. Характерно большое количество скрытых (стертых) форм, вибрионосительство. Обнаружение возбудителя в воде напрямую связано с наличием больных или бактерионосителей. Холерные вибрионы 01 группы могут длительно находиться в водных экосистемах в виденекультивируемых форм.

Лабораторная диагностика.Холера относится к группе особо опасных инфекций, культивирование ее возбудителя требует соблюдения особого режима биологической безопасности. Основной метод диагностики — бактериологический, включает выделение и идентификацию возбудителя.

Материал для исследования — испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки.

Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально — диагностические среды (лучше TCBS). В качестве транспортной среды наиболее удобна 1% пептонная вода. Подозрительные стекловидные прозрачные колонии пересевают для получения чистой культуры, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, подвижности, антигенным свойствам, фаготипируют.

Для ускоренной диагностики применяют иммунолюминесцентный метод, биохимическую идентификацию с набором индикаторных дисков, для обнаружения холерных вибрионов в первичных материалах — РНГА с антительным диагностикумом, для выявления некультивируемых форм — ПЦР, для определения вирулентности и синтеза холерогена — биопробы на кроликах — сосунках, ИФА, ДНК- зонды (выявление фрагмента хромосомы, несущего оперон холерогена).

Специфическая профилактика.Имеются различные вакцины — убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность). Может проводиться антибиотикопрофилактика (превентивная терапия) тетрациклином и другими антибиотиками.

V.parahaemolyticus(парагемолитический вибрион) является галофилом, встречается в морской воде (Японского, Черного, Каспийского и других южных морей). При употреблении морских продуктов, не подвергнутых достаточной термической обработке, этот возбудитель вызывает у людей пищевые токсикоинфекции и дизентерия — подобные заболевания. Вызывает гемолиз на кровяном агаре с повышенной концентрацией хлористого натрия (на 7% NaCl — штаммы с энтеропатогенными свойствами).

V.vulnificus— наиболее патогенный вид для человека из нехолерных вибрионов. Выявляют в морской воде и ее обитателях. Вызывает раневые инфекции, септицемии и другие заболевания. Ферментирует сахарозу и лактозу, на TCBS — агаре образует желтые колонии.

Семейство вибрионов. Vibrionacea. Род – Vibrio.

Очень широко распространены в природе. В пресноводных, в соленых водоемах. Есть и патогенные и безопасные виды микроорганизмов. Они широко распространены в природе. Нас интересует семейство вибрионов – к нему относится возбудитель холеры.

Холерный вибрион. Холера – особо опасная карантинная болезнь, вызываемая вибрионом, характеризующуяся токсическим поражением тонкого кишечника, нарушением водно солевого обмена, обезвоживанием и высокой летальностью. Одна из древнейших болезней человека. Ее очагом являлся индо-китайский полуостров. До 1960 года было известно 6 пандемий холеры. Они были связаны с возбудителем, который открыл Кох. Описал в1883 и назвал V.cholerae– коховский вибрион.V.eltor– не признавался холерным, считался условно патогенным, а последняя пандемия с конца 40х годов, захватила большие пространства и решили, что это тоже патогенный вибрион. Последняя 7 пандемия связана сV.eltor. у нас захвтила Одессу, астрахань и прочий ЮГ. По всей волге обнаруживали холерный вибрион.

В 1993 году появились сообщения о V.O139. Он признан 3м возбудителем.

Морфология. Вибрион представляет собой изогнутую палочку толщино 0,3, длинно – 3. один, полярно рапсолоенный жгутик в 2 раза длиннее самой бактерии. Очень высоко подвижна, спор капсул не образует, Гр(-), в исследуемом материале может располагаться в виде стайки рыбок. Биовар эльтор характеризуется полиморфизмом – короткие, толстые.

Культуральные свойства – газовое престрастие. Это аэробный микроб. Это щелочо любивый микроб. Оптимум ph7,6-8? Способны размоножаться при 9,2. К пиаттельным средам не призотлив, но на щелочных средах растет очень хорошо и быстро, существенно опережая рост других бактерий. Через 4-6 часов – пленка на поверхности щелочного бульона.

Специальные питательные среды для культивирования вибрионов.

1% пептонная вода. Достаточно бедная питательная среда. Щелочной мясо-пептонный агар, и щелочной мясо-пептонный бульон. Селективно-дифференциальная среда ТЦБС агар — тиосульфат натрия, сульфат натрия, соли желчных кислот и сахарозу. Кроме того она содержит индикатор(видно расщепляет ли сахарозу). Рост в идее С формы – гладкие, прозрачные колонии слегка голубоватые, на ТЦБС – желтые.

Биохимические свойства холерного вибриона

Высокая биохимическая активность, ферментирует сахарозу, мальтозу. Разжжают желатин. Образуют индол, не образуют сероводород, имеют оксидазу и декарбоксилазу.

Антигенные свойства. Имеется термостабильный О антиген, соматический липополисахаридный. Выделяют 150 серогрупп по антигену. Антигены сероруппы О1 включают 3 компонента –A,B, С. Те штаммы, которые содержат А,В относятся к штамму Огава, АС – Инаба, А,В,С – Гикошима. Кроме того вибрионы имеютHантиген, общий для всего рода.

Фаги холерных вибрионов – биовары, есть фаги, котоыре биовароспецифические. Используются в фагодиагностике. Различают биовары по способности ратси на среде с полипепсином, по способности лизировать эритроциты.

Патогенность– свойства адгезивность – ворсинки и мембранные белки, колонизации – способность приживаться в щелочной среде тонко кишичника. Основной фаткор патогенности является эндотоксин – холероген, содержит 2 субъединицы- А и В. Субъединица В – обусловливает проникновение в клетки эпителия субъединицы А, а субъединица А активизирует клеточную аденилатциклазу, что приводит к накоплению ЦАМФ, что приводит к выходу электролитов и жидкости в просвет кишки. Переполнение просвета кишки жидкости и объясняет симптом поноса. Кроме того вибрионы выделяют цитотоксин, котоырй содержит эндотоксин, выделяют ферменты- нейроминедазу, ДНКазу, лецитиназу. Резистентность вибриона во внешней среде. В сравнении с энтеро бактериями низкая. Вибрионы погибают при высушивании, при действии фиолетовых лучей, при кипячении мнгновенно. Очень чувствительны к действию кислот, растворы хлористо-водородной и серной кислот в концентрации 1-1000 и даже 1 – 10000 убивают через несколько минут. Вместе с тем вибрионы в воде сохраняются достаточно долго, во льду. Эльтор более устойчив, чем классический биовар.

Эпидемиология. Холера – антропонозная болезнь – или больной или вибрионо носитель. Резервуар инфекции любая водная среда. Механизм заражения – фекально – оральный. Пути – водный, пищевой, контактно-бытовой. Факторы передачи могут быть – вода, пищевые продукты и пр. Сезонность – летняя, касаясь патогенеза – кислая среда желудка губительна и для того, чтобы наступило заболевания вибрионы должны попасть минуя желудок в 12перстную кишку, в щелочнуюph.

Микробы там колонизируются , размножаются, выделяют холенорген, котоырй нарушает всасывание электролитов и жидоктси и вызывает симптом диареи. Вся клиника холеры делистя на 3 периода – холерный энтерит. Понос – вода со слизью – рисовый отвар. Стул до 40 раз в сутки, развиваются электролитные нарушения и интоксикация усиливается. Вторая стадия – холерный гастроэнтерит – присоединяется рвота. Если не лечить, не диагностировать наступает стадия холерного алгида. У таких больных понос прекращается, рвота тоже.

Иммунитет— после выздоровления – стойкий, продолжительный, повторных случаев не встречается.

Диагностика– цели диагностики – подтверждение диагноза, выявление носителей и санитарнео исследование. Методы – основной – бактериологический, основан на выделении и идентификации возбудителя. Материал для исследования – испражнения, рвотные массы, материал аутопсии, вода, пищевые продукты, смыв с поверхности санитарных объектов. Взятие пробы и ее доставка в лабораторию осуществляется со всеми предосторожностями, какие необходимы при работе с особо- опасными возюбудителями. Само выделение проводят в 5 этапах

  1. Микроскопия и посев парралельно на пептонную воду, щелочные среды и на ТЦБС агар, через 4-6 часво берут пленку с поервхности пептонной воды. Делают второй высев и на плотные среды. После полученяи изолированных колоний, их идентифицируют по ферментативных, культуральным, антигенным свйосвтам, по чувствительности к бактериофагу, по подвижности. Вся диагностика в среднем – 18-48 часов. Максимум – 3 дня.

Другие методы диагностики – серологический – опеределние антиетл. Для экспресс диагностики ПЦР реакция. Бактериоскопический в настоящее время из за низкой информативности не используется. Лечение проводится в 2х направлениях. Это восполнение потерь жидкости – восстановление водно-солевого обмена, антибактериальная терапия.

Специфическая профилактикапо эпид показаниям. Используется вакцина химическая, котоаря из 70% холероген анатоксина и на 30% из О антигена, включающего все биовары и серовары Инаба и Огава.

Парагемолитические галофильные вибрионы. Это не холерные вибрионы, которые растут при избытке поваренной соли. Первые сведенья 70е года 20го века.V.parahaemolyticus,V.alginolyticus.,V.Vuknificus,V.fluorislis.

Морфология типичная. Их культуральная особенность – не растут без добавления NaCl, среды теже. Есть О и Н антигены, особенность факторов патогенности – их экзотоксин обладает гемолитическими летальными некротоксическими свойствами. Эти вибрионы свободно обладают в морях, на юге, в теплой воде. Резервуар и истчник инфекции для человека – не обработанные термические морепродукты. Пути заражения – пищевой и водный, существует и контактный и аэроенный.

V.parahaemolyticus– пищевая инфекция в Японии из за употребления Суши.V.alginolyticus. Тоже.

Vulnificus– обнаруживается в морской воде. Вызывает у человека пищевые токсикоинфекции, иногда генерализация сразу, пневмония у людей, котоырй наглотался воды, раневые инфекции с некрозом, уретриты и эндометриты, заболевания начинается остро. Эндотоксин патогенный очень мощный.

V.fluorislis– холеро подобный гастродуаденит. Понос и рвота, абдоминальные боли.

Лабораторная диагностика заболеваний.

Основной метод – бактериологчиеский. Первичный посев производят на щелочные солевые среды и ТЦБС агар. Идентиикацию проводят по ключевым признакам. По сахаролитическим свойствам и при NaСl.

Лечение такое же как при холере – антибиотики. Спец профилактки не рахзработано

Источник: StudFiles.net

Холерный вибрион

V. cholerae был выделен Р. Кохом в 1882 г., а V. eltor — на карантинной станции Ель-Тор также в Египте. Другие роды данного семейства содержат условно-патогенные виды (V. proteus, вибрион Мечникова, V. plesiomonas, светящийся вибрион), которые могут вызвать гастроэнтериты.

Морфология и физиология

Слегка изогнутая грамотрицательная полиморфная палочка. Монотрих. Спор и капсул не образует. Вибрионы относятся к хемоорганотрофам с окислительным и бродильным типами метаболизма. Ферментируют многие углеводы: глюкозу, мальтозу, сахарозу и другие с образованием кислоты. Разжижают желатин, образуют индол, восстанавливают нитраты в нитриты. Продуцируют такие ферменты как лецитиназа, лизиндекарбоксилаза, орнитиндекарбоксилаза, нейраминидаза. Способность восстанавливать нитраты и образовывать индол лежит в основе положительной нитрозоиндоловой пробы — реакции холера-рот. Вибрионы хорошо растут на простых средах при щелочной реакции рН = 8,5-9,0. На плотных средах образуют небольшие прозрачные круглые колонии, на жидких — пленку с легким помутнением среды. Вибрионы — факультативные анаэробы, образуют цитохромоксидазу.

Антигены

Холерные вибрионы имеют два антигена: О-антиген типоспецифический термолабильный и Н-антиген жгутиковый видоспецифический термостабильный. Возбудители холеры имеют 01-антиген. Вибрионы, относящиеся к серогруппам 02, 03, 04 могут вызвать энтериты и гастроэнтериты. 01-антиген состоит из трех компонентов — А, В, С, разные сочетания которых образуют серовары Огава (АВ), Инаба (АС), Гикошима(АВС). Часто выделяются вибрионы, не агглютинирующиеся 01 антисывороткой. Их называют неагглютинирующимися НАГ-вибрионами.

Патогенность и патогенез

Холерный вибрион с помощью жгутика и фермента муциназы проникает в слизистую оболочку тонкой кишки и прикрепляется к энтероцитам. Адгезия происходит за счет филаментоподобного вещества, находящегося на клеточной стенке вибриона. Затем начинается колонизация слизистой кишки. При этом вибрионы не проникают в энтероциты, а находятся на их поверхности.Основным фактором патогенности вибриона является секреция белковых токсинов. Это прежде всего холероген, который относится к функциональным блокаторам. Он, как и многие другие экзотоксины, состоит из двух субъединиц А и В. Последняя не ядовита. Она обеспечивает прикрепление специфического рецептора мембраны энтероцитов тонкой кишки — моносиалоганглиозида — к клеткам кишечного эпителия, способствующего трансмембранному переносу А-субъединицы в цитоплазму. Субъединица А обеспечивает токсичность, вызывая активацию аденилатциклазы. Это приводит к увеличению количества цАМФ (циклический монофосфат) и соответственно — к нарушению водно-солевого обмена, обусловленного выделением ионов натрия и хлора и обезвоживанию организма — характерного синдрома холеры. При этом организм теряет до 30 л жидкости в сутки. Одновременно блокируется АТФ-аза, что приводит к нарушению внутриклеточного транспорта и потере воды, а также нарушению межклеточных контактов. Холерный вибрион, так же как и другие грамотрицательные бактерии, образует эндотоксин (ЛПС в составе клеточной стенки), который защищает возбудителя от фагоцитоза и обладает другими функциями.

Иммунитет

При холере наблюдается гуморальный иммунный ответ, который характеризуется появлением антитоксических (к холерогену) и антибактериальных иммуноглобулинов. При этом существенную роль играют секреторные иммуноглобулины (SIgA), препятствующие адгезии вибриона.

Экология и эпидемиология

Единственным источником инфекции в природе является больной человек и бактерионосители. При холере El-Тог отмечается длительное бактерионосительство и многочисленные атипические формы болезни, что способствует распространению возбудителя. Заражение человека происходит через воду или продукты. Возможно заражение контактным путем. Холера является древнейшей инфекцией, которая периодически распространялась на многие страны и континенты, унося миллионы жизней. До сих пор эндемическим очагом холеры считаются бассейны рек Ганга и Брахмапутры в Индии.

Холера

Холера — острая, карантинная, особливо опасная инфекционная болезнь с фекально — оральным механизмом передачи характеризуется обильным поносом,рвотой, сильной интоксикацией и обезвоживанием организма. Возбудителями заболевания являются два биовары холерного вибриона Vibrio cholerae и Vibrio eMgrJDбидва относятся к роду Vibrio семьи Vibrionaceаe. Кроме этих возбудителей, к роду Vibrio относятся также условно-патогенные вибрионы: V.metschnikovii, V.parahaemolyticus, V.alginolyticus, V.vulnificus, V.fluvialis. При определенных условиях они могут вызвать у человека гастроэнтерит.

Взятие и доставка материалов

Для микробиологического исследования стерильной ложкой берут испражнения, рвотные массы, промывные воды больного в объеме 10-20 мл, переносят их раздельно в стерильные стеклянные банки, закрывают стеклянными или резиновыми пробками и заливают парафином. Наилучшие результаты дает исследование проб, взятых до начала антимикробной терапии.Вторую порцию испражнений и рвотных масс в объеме 1-2 мл засевают у постели больного в 10-50 мл транспортной среды (1% пептонная вода рН 7,8 или рН 9,3). Если стула в момент забора материала нет, вырезают загрязненные фекалиями участки белья. Исследуют также желчь, взятую с помощью дуоденального зондирования.Во время эпидемической вспышки холеры широко практикуют ректальный забор. Для этого стерильный ватный тампон или алюминиевую петлю вводят в прямую кишку на глубину 5-19 см, забирают содержимое и вносят во флакон или пробирку с 1% щелочной лептонной водой.От трупа берут небольшие участки тонкой кишки с верхнего и нижнего отдела, перевязывают с обоих концов лигатурами. Убирают также отрезок прямой кишки длиной 10-15 см. Желчный пузырь вырезают части паренхимы печени.При бактериологическом обследовании людей, которые были в контакте с больными или вибрионосиямы, а также реконвалесцентов перед выпиской из стационара целесообразно заранее дать им слабительное, которое одновременно действовало бы и как желчегонное (напр. 25-30 г сульфата магния). Для исследования отбирают жидкую часть стула, поступивших из верхнего отдела тонкой кишки и имеют содержимое желчного пузыря.По эпидемиологическим показаниям исследуют воду открытых водоемов, водопроводную воду, сточные воды, ил, гидробионтов (рыб, лягушек, устриц, моллюсков, рачков и т.д.), пищевые продукты. Смывы с объектов окружающей среды отбирают с площади 0,25 м2 ватными тампонами, смоченными 1% щелочной лептонной водой, и в ней транспортируют в лабораторию.На каждую банку, флакон, пробирку наклеивают направление, в котором указывают фамилию, инициалы, возраст больного, его домашний и служебный адрес, предварительный диагноз, дату и время взятия проб, подпись врача, направившего материалы. Отобранные пробы необходимо доставить в лабораторию в течение 3-х часов. Если это невозможно, материал сеют в 1% пептонную воду теллурита калия (1:100000) и на чашки со щелочным мясопептонного агаром. При большом расстоянии до лаборатории все пробы помещают в металлические пеналы, или банки, обмостившы ватой или стружками. Затем их упаковывают в деревянный ящик, пломбируют, надписывают «верх, осторожно!» и с большими предосторожностями специальным транспортом с посланцем доставляют в лабораторию.Холера — особо опасное заболевание. Поэтому бактериологическое исследование нужно проводить в режимных лабораториях, в которых работает специально подготовленный персонал. Если вблизи такой лаборатории нет, исследуемый материал направляют в ближайшую обычной бактериологической лаборатории. Тогда прием других анализов прекращают, устанавливают строгий противоэпидемический режим, персоналу запрещают работать натощак. Лаборатория должна работать круглосуточно.

Бактериологическое исследование

Лабораторная диагностика холеры имеет исключительно большое значение, поскольку выделение возбудителя дает право установить окончательный диагноз и развернуть профилактические меры для прекращения эпидемического распространения заболевания. Кроме того, она позволяет выявить вибрионосиив, оценить контроль за объектами окружающей среды и эффективность дезинфекции. Бактериологическое диагностику проводят поэтапно.Первый этап. Изучаемых материалов изготавливают мазки, фиксируют спиртом или смесью Никифорова, окрашивают по Граму и микроскопируют под иммерсионным объективом. Холерные вибрионы выглядят немного согнутыми палочками красного цвета, расположенными между тяжами слизи в виде своеобразных скоплений, напоминающих «стайке рыбок».Наряду с типичными вибрионами в мазках время проявляют шаровидные, колбоподибни, спиралевидные клетки. Это уменьшает диагностическую ценность бактериоскопического метода. На этом этапе с целью ускорения исследования целесообразно использовать реакцию иммунофлюоресценции с мечеными диагностическими 01 холерными сыворотками и РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом. Используют и имуноиушовий метод: фиксированные мазки обрабатывают 2 мин во влажной камере тушью, смешанной с противохолерной сывороткой, промывают и микроскопируют. Холерные вибрионы окрашиваются в черный цвет.Для быстрого и надежного обнаружения холерных вибрионов в различных объектах окружающей среды, особенно тех, которые плохо или совсем не культивируются, используют метод полимеразной «цепной реакции.Одновременно с бактериоскопию проводят посев исследуемого материала вжидкие и на плотные питательные среды. Из жидких сред чаще используют 1% щелочную пептонную воду теллурита калия и среда Монсури, из плотных — щелочной МПА, селективные среды TCBS, Аронсона, Монсури. Посевы делают в 1% пептонную воду, щелочной МПА и на одно из селективных сред (лучше всего TCBS). При доставке материала в транспортной среде из него делают висел в 50 мл 1% лептонной воды рН 9.3 (среда обогащения).tVСреда Аронсона: МПА, к которому добавляют сахарозу и фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия.Среда Монсури: на 1 литр дистиллированной воды берут 15 г агар-агара, 1 г желатина, 10 г хлорида натрия, 50 г таурохолаиу натрия, ЗО г карбоната натрия.Среда TCBS (тиосульфат-цитрат-бромтимол сахарозный агар) имеет стандартный состав, выпускается в готовом сухом виде. На 1 л дистиллированной воды добавляют 69 г сухого порошка.Второй этап. Через 5-6 ч инкубации посевов в термостате производят мазок с поверхности жидкой среды, висящую каплю для определения подвижности и проводят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с 01 (или RO, 0139) диагностической сывороткой («слайд-агглютинация»).Одновременно делают высев с 1% пептонной воды на щелочной МПА или другие селективные среды с целью получения изолированных колоний. При отсутствии видимого роста в первой лептонной воде производят высев из нее в другую пептонную воду (в случае первоначального посева в среду обогащения с рН 9,3 дальнейшее висел над ним проводят через 14-20 ч). Посевы в жидкие и на плотные среды проводят большой бактериологической петлей диаметром 5 мм. По результатам исследования выдают предварительный ответ об обнаружении холерного вибриона.Третий этап. Посев из второй среды обогащения производят на щелочной МПА (или один из элективных плотных сред) через 5-6 ч при рН 7,8 и через 14-20 ч при рН 9,3.Четвертый этап. Через 16-24 ч выращивания посевов на плотных элективных средах проводят макро-и микроскопическое исследование изолированных колоний и пересел на двовуглеводне среду Ресселя (лакгозно-сахарозный агар) или на тривуглеводне среду Клиглера (глюкозо-лактозо-сахарозный агар) с целью выделения чистой культуры и ее идентификации.Колонии холерных вибрионов на щелочной МПА в типичной S-форме имеют размеры 2-3 мм, круглые, гладкие, плоские, голубоватые, прозрачные, гомогенные, с ровными краями, маслянистой консистенции, легко снимаются петлей и емульгуються. При посеве материалов от больных, принимавших антибиотики, и виброносиив, могут вырастать атипичные колонии. На агаре Аронсона колонии холерных вибрионов имеют ярко-красный цвет, в среде TCBS они желтые на зеленом фоне, в среде Монсури колонии без цвета, полупрозрачные, с темным центром. С колониями на щелочной МПА ставят пробу на оксидазу, а с теми колониями, выросшие на элективных средах, эту пробу ставить нецелесообразно.При отборе колоний используют индикаторные бумажки (СИП-1 — набор для идентификации вибрионов). Оксидазопозитивни колонии проверяют в «слайд агглютинации» с холерной сывороткой 01 (R0, 0139) в разведении 1:100 и вариантоспецифичнимы сыворотками Инаба и Огава (1:50) готовят мазки для окраски по Граму и обрабатывают люминесцентной сывороткой. Положительные результаты дают право выдать предварительный ответ об обнаружении холерного вибриона.Пятый этап. Исследуют характер роста на поливуглеводних средах. Холерный вибрион на агаре Ресселя меняет цвет столбика при сохранении первоначального цвета скошенной части без образования газа. Среда Клиглера желтеет полностью без образования газа и сероводорода. Культуры проверяют по морфологическим и аглютинабельнимы свойствами, а в случае необходимости определяют группу по Хейберг.Ставят также развернутую объемную реакцию агглютинации в пробирках по общепринятой методике в соответствии с инструкцией к диагностической сыворотки. При отсутствии реактивов на оксидазу можно использовать пробу «тяжа». На предметное стекло наносят каплю 0,5% водного раствора дезоксихолат натрия или 2,5% раствора моющего средства «Прогресс», добавляют полную петлю агаровой культуры исследуемых вибрионов и тщательно перемешивают. При положительной реакции суспензия немедленно теряет мутность, становится слизистой и вязкой — тянется за петлей в виде тяжа, что характерно для вибрионов.В последнее время разработаны тесты для дифференциации классического варианта холерного вибриона от биовары эльтор.Чувствительность выделенных культур холерных вибрионов к антибиотикам и химиотерапевтических препаратов определяют с помощью метода диффузии в агар с использованием стандартных дисков или методом серийных разведений.Шестой этап. Окончательно учитывают результат идентификации чистых культур и выдают окончательный ответ о выделении холерного вибриона серогруппы: ОИ, RO (Инаба, Огава, Гикошима) или 0139. Если выделенные вибрионы по большинству признаков относятся к холерных, но аглютинуються сыворотками, выдают ответ о выделении холерных вибрионов не ОИ группы (так называемых НАГ-вибрионов). Обязательно отмечают гемолитическую активность, чувствительность к антибиотикам и лизис культуры соответствующим бактериофагом.

Методы ускоренной диагностики

Наилучшим является люминесцентно-серологический метод, он дает возможность через 1,5-2 ч выявить холерных вибрионов в исследуемом материале, а также в среде после подращивания в количестве 106 микробных клеток в 1 мл. Методика изготовления мазков, обработка люминесцентной сывороткой, микроскопия и оценка результатов является общей для выявления всех видов бактерий. Она изложена в инструкции, прилагаемой к сыворотки.С помощью метода иммобилизации вибрионов под влиянием специфической холерной 01 сыворотки можно выявить возбудителя в течение 15-20 мин при концентрации в исследуемом материале не менее чем 105 микр.тил / мл. На предметное стекло наносят 2 капли жидких испражнений, рвотных масс или верхнего слоя (пленки) из среды накопления. Первую каплю накрывают покровным стеклом (контроль), ко второй добавляют каплю холерной 01 сыворотки (1:100), перемешивают и также накрывают покровным стеклом. Надавленные капли исследуют под фазово-контрастным микроскопом или используют темнопольный конденсор. При наличии в пробах холерных вибрионов в первой капли видны характерное движение, во второй — иммобилизация микробных тел и их агглютинация.Для ускоренной диагностики применяют также чувствительную реакцию непрямой гемагглютинации с использованием холерного антительного эритроцитарного диагностикума.

Метод массового исследования на вибриононосительство

Метод массового исследования на вибриононосительство проводят во время эпидемических вспышек холеры. Стул одновременно забирают из прямой кишки алюминиевыми петлями от 10 человек, рационально сгруппированы, и вносят их в одну колбу с 200 мл щелочной лептонной воды и 01 холерной агглютинирующие сывороткой, разведенной до половины титра. Инкубацию проводят при 37 ° С в течение 3-4 часов. Холерные вибрионы, размножились, начинают аглютинуватись и в виде хлопьев опадают на дно колбы. При положительном результате материал забирают от каждой из 10 человек и исследуют раздельно. Такой метод дает значительную экономию питательных сред и рабочего времени бактериологов.

Серологическое исследование

Серологические исследования имеют лишь вспомогательное значение и сводятся к определению в сыворотке крови и вибрионосиив вибриоцидних антител, агглютинины и антитоксина. От больных нужно брать парные сыворотки с интервалом в 8-10 дней (первую пробу берут на 3-5 день болезни).Наиболее чувствительной является реакция определения вибриоцидинив. Эти антитела определяются с 3-го дня заболевания в титрах 1:100-1:1000 и максимально нарастают к 10-12-го дня. При постановке реакции сначала изотоническим раствором хлорида натрия разводят комплемент 1:20 и разливают его в ряд пробирок по 0,9 мл. Затем в первую пробирку вносят 0,1 мл сыворотки больного, перемешивают и последовательно переносят по 0,1 мл в разведении 10в-10, получая десятикратные разведения в объеме 0,9 мл. В каждую пробирку добавляют по 0,1 мл суспензии культуры холерного вибриона, в которой содержится 1 -2 тыс. микробных клеток. Реакцию сопровождают соответствующими контролями комплемента, сыворотки и культуры. Пробирки выдерживают при 37 ° С в течение 60 мин и делают высев из них на секторы агара в чашках Петри, инкубируют в термостате 18-20 ч и подсчитывают количество выращенных колоний. Титром вибриоцидних антител считают максимальное разведение сыворотки, которое вызывает гибель не менее 50% вибрионов по сравнению с количеством колоний, выросших после посева из пробирки контроля комплемента.Противохолерную и противооспенную агглютинины выявляют с помощью развернутой реакции агглютинации. Исследуемую сыворотку разводят 1% щелочной пептонной водой в объеме 1 мл от 1:10 до 1:640. Антигеном служит 3-часовая бульонная культура холерного вибриона, который выделили в данном очаге. В два ряда пробирок с розтитрованимы парными сыворотками вносят по 1 капле культуры и ставят на 60 мин в термостат при 37 ° С, потом до утра в холодильник, после чего учитывают результаты. Реакцию сопровождают, как обычно, контролями сыворотки и антигена. Результат считают ориентировочно положительным при агглютинации Первую сыворотку в разведении 1:40 и выше. Диагностическое значение имеет не менее чем 4-кратное нарастание титра антител в реакции с другой сывороткой.Более чувствительной и специфичной считают двухкомпонентную реакцию непрямой гемагглютинации с эритроцитарным холерным диагностикумом. Необходимые компоненты реакции и методика ее постановки в макро-и микрообъемах приведены в инструкции диагностикума. Обязательно нужно ставить и эту реакцию методом парных сывороток. Диагностическое значение имеет хотя 4-кратный нарастание титра антител в динамике.Определение антитоксинов в сыворотке крови проводят с помощью непрямой гемагглютинации. Исследуемую сыворотку разводят микроабо макрообьемним способом и добавляют эритроцитарный холерный энтеротоксигенными диагностикум. Диагностическим титром считают разведение сыворотки 1:160. Целесообразно исследовать парные сыворотки.

Исследование материалов среды

Чаще исследуют воду открытых водоемов, водопроводную воду, гидробионтов, пищевые продукты, мух, смывы с различных предметов.В исследуемую воду (две пробы по 500 мл) добавляют раствор основного пептона до 1% концентрации, инкубируют 5-8 ч при 37 ° С и исследуют поверхностную пленку так же, как и пленку с пептонной воды после посева кала или рвотных масс. Надежные результаты получают при использовании метода фильтрации через мембранные фильтры № 2 или 3, смывы из которых после фильтрации воды засевают в щелочную пептонную воду и на селективные среды. При этом исследуют большие количества воды (1,5-2,5 л). С смыва из фильтров можно делать мазки для окраски их люминесцентной холерной сывороткой, а также ставить реакцию непрямой гемагглютинации.От гидробионтов после их вскрытия сеют желчный пузырь, желудок и кишечник (после их гомогенизации) в 1% щелочную пептонную воду и на элективные агар. Дафний и рачков растирают в ступке и засевают петлей в 1% пептонную воду.Твердые продукты питания измельчают, растирают в ступке с физиологическим раствором хлорида натрия и засевают в количестве 10 г в 50-100 мл 1% пептонной воды и на агаровые среды. Молоко и молочные продукты, смывы с объектов окружающей среды и мух засевают в 1% пептонную воду и исследуют по обычной схеме.В различных объектах окружающей среды могут находиться и другие представители семейства Vibrionaceae, морфологически подобные вибрионов. Особенно это касается родов Aeromonas, Pseudomonas и Plesiomonas. Отличить их от холерных и холероподобных вибрионов можно, в основном, по биохимическим тестам.Для видовой идентификации холерных вибрионов ведущими тестами является агглютинация культуры 01 холерной сывороткой, лизис холерным фагом СIV или eltor 2.

Профилактика и лечение

Основные средства борьбы с холерой — раннее выявление больных и вибрионосителей, а также лиц, контактировавших с ними с последующей их изоляцией. Для вакцинопрофилактики используют несколько видов вакцин: корпускулярная убитая, холероген-анатоксин, живая для перорального применения. В нашей стране массовая вакцинация не проводится. Для поздней профилактики и лечения чаще всего применяют тетрациклин.

Источник: vse-zabolevaniya.ru

Холероподобный вибрион

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.