Выявление в сыворотке крови специфических антител к бледной трепонеме (Treponemapallidum), используемое для подтверждения результатов неспецифических тестов на сифилис, скрининга сифилиса, обследования контактных лиц и доноров крови.

Синонимы русские

Люэс, бледная трепонема.

Синонимы английские

Syphilis, passive hemagglutination test; Syphilis, indirect hemagglutination test; Treponema Pallidum Hemaglutination Assay, TPHA.

Метод исследования

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до сдачи крови.

Общая информация об исследовании

Сифилис – инфекция, передающаяся половым путем, возбудителем которой является спирохета Treponema pallidum subspecies pallidum.


падание этой бактерии в организм приводит к развитию иммунного ответа, сопровождающегося выработкой как неспецифических («нетрепонемных»), так и специфических («трепонемных») антител. Выявление антител к T. pallidumсоставляет основу лабораторного подтверждения сифилиса. В зависимости от типа антител, определяемых в реакции, серологические исследования разделяют на неспецифичексие («нетрепонемные») и специфичексие («трепонемные»). Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) относится к «трепонемным», то есть специфическим в отношении T. pallidum тестам.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых адсорбированы антигены T. pallidum (реагент РПГА), при добавлении к ним сыворотки больного сифилисом, содержащей специфические антитела к спирохете. Такие антитела появляются в крови пациентов с сифилисом через 2 (IgM) и 4 (IgG) недели после инфицирования. Следует отметить, что этот период может удлиняться до 6 недель. Поэтому чувствительность РПГА в первичном периоде сифилиса несколько уступает чувствительности этого метода во вторичном и третичном периодах и составляет около 86 %. Преимуществом РПГА является высокая специфичность (96-100 %), позволяющая использовать этот анализ в качестве подтверждающего теста после положительного результата какого-либо неспецифического, «нетрепонемного» исследования (например, антикардиолипинового теста, RPR). Чувствительность РПГА во вторичном, третичном периоде сифилиса, а также при скрытом сифилисе составляет 99-100 %.


Чувствительность РПГА и других «трепонемных» тестов превосходит чувствительность неспецифических («нетрепонемных») тестов, таких как микрореакция преципитации (МРП) с кардиолипиновым антигеном. Поэтому в последнее время в качестве скринингового теста на сифилис стали чаще применять «трепонемные» тесты, в том числе РПГА. При положительном результате скринингового исследования на сифилис с помощью РПГА следует провести подтверждающий тест. В этом случае им является любой другой «трепонемный» тест, но не РПГА (например, иммуноферментный анализ).

Как правило, результат РПГА остается положительным даже после лечения сифилиса. Исключение составляет ситуация, когда терапия была проведена в самом начале заболевания. Так как результат сохраняется положительным пожизненно, РПГА не предназначена для дифференциальной диагностики раннего и позднего сифилиса. По этой же причине данное исследование не используют, чтобы оценивать эффективность лечения заболевания.

При добавлении сыворотки больных сифилисом к реагенту РПГА происходит агглютинация (склеивание) и выпадение в осадок эритроцитов. Степень агглютинации зависит от концентрации антител в сыворотке, поэтому РПГА позволяет не только выявить присутствие антител, но и определить их количество. Результат анализа представлен в виде титра антител. Любой положительный титр указывает на возможную инфекцию T. pallidum, однако возможны ложноположительные реакции. Значительно повышенные показатели характерны для вторичного и скрытого раннего сифилиса.


Ложноположительные результаты РПГА наблюдаются в 0,05-2,5 % случаев и чаще всего обусловлены наличием в сыворотке пациента аутоантител (при системных заболеваниях соединительной ткани, например при системной красной волчанке), антител к другим возбудителям, схожим по антигенной структуре с T. pallidum (Borrelia burgdorferi, сапрофитные трепонемы полости рта и гениталий), а также другими физиологическими и патологическими состояниями (беременность, онкологические заболевания, острый инфаркт миокарда). Как правило, титр ложноположительной реакции РПГА низкий. Исключение составляют результаты РПГА у пациентов с диффузными заболеваниями соединительной ткани и злокачественными новообразованиями, когда титр антител может достигать очень высоких значений. Ложноположительные реакции негативируются спонтанно и бесследно в течение 4-6 месяцев (острая ложноположительныя реакция, часто на фоне беременности) или более длительного периода (хроническая ложноположительная реакция).

Учитывая эти особенности, результат РПГА следует интерпретировать с учетом дополнительных анамнестических и лабораторных данных. При подтверждении диагноза «сифилис» необходимо исключить наличие других инфекций, передающихся половым путем, а также обследовать всех половых партнеров и членов семьи пациента.

Для чего используется исследование?

  • Чтобы подтвердить диагноз «сифилис» при положительном результате неспецифического скринингового теста;
  • для скрининга сифилиса;
  • для обследования лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
  • для исключения сифилиса у донора крови.

Когда назначается исследование?

При обследовании:

  • пациента с клиническими признаками сифилиса (безболезненный эрозивный или язвенный дефект на твердом основании) и регионарной лимфаденопатии (первичный сифилис), полиморфная кожная сыпь, многоочаговая или диффузная алопеция, сифилитическая лейкодерма (вторичный сифилис), плотноэластический узел с распадом или формированием «сухого» рубца (третичный сифилис);
  • лиц, находившихся в половом и тесном бытовом контакте с больным сифилисом;
  • донора крови;
  • при ежегодном профилактическом обследовании, госпитализации в стационар, оформлении санитарной книжки.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Причины положительного результата:

  • первичный, вторичный, третичный, а также скрытый сифилис (приобретенный и врожденный);
  • беременность;
  • ВИЧ-инфекция;
  • гепатиты В и С;
  • употребление инъекционных наркотиков;
  • острый инфаркт миокарда;
  • диффузные заболевания соединительной ткани;
  • возвратный тиф;
  • лептоспироз;
  • клещевой боррелиоз;
  • тропические трепонематозы (фрамбезия, беджель, пинта);
  • воспалительные процессы, обусловленные сапрофитными трепонемами полости рта и гениталий;
  • злокачественные новообразования;
  • обширная травма и переломы;
  • бактериальный эндокардит;
  • туберкулез;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • поствакцинальная реакция.

Причины отрицательного результата:

  • отсутствие сифилиса;
  • первые 2-4 недели после инфекции T. pallidum;
  • неправильное взятие материала на исследование.

Что может влиять на результат?

  • Результат анализа может быть ложноотрицательным в течение первых 2-4 (до 6) недель после заражения.

Важные замечания

  • Исследование не позволяет дифференцировать;
    • сифилис (T. pallidum) и другие трепонематозы (T. pallidumsubspeciespertenue, endemicum, carateum);
    • ранний и поздний сифилис.
  • Исследование не предназначено для контроля лечения сифилиса.
  • Результат анализа следует оценивать вместе с дополнительными анамнестическими, лабораторными и инструментальными данными.

Также рекомендуется

  • Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр
  • Treponema pallidum, IgM, титр
  • Treponema pallidum, IgG, титр
  • Treponema pallidum, IgG вликворе
  • Treponema pallidum, антитела

  • HIV 1, 2 Ag/Ab Combo (определение антител к ВИЧ типов 1 и 2 и антигена p24)
  • Вирусный гепатит B. Контроль активности вируса перед началом лечения
  • Вирусный гепатит C. Анализы для первичного выявления заболевания. Обследование контактных лиц
  • Интимный – оптимальный – анализ мазка у мужчин
  • Интимный – оптимальный – анализ мазка у женщин
  • Госпитализация в хирургический стационар
  • Госпитализация в терапевтический стационар

Кто назначает исследование?

Дерматовенеролог, невролог, врач общей практики, эпидемиолог.

Литература

  • French P, Gomberg M, Janier M, Schmidt B, van Voorst Vader P, Young H; IUST. IUSTI: 2008 European Guidelines on the Management of Syphilis. Int J STD AIDS. 2009 May;20(5):300-9.
  • Seña AC, White BL, Sparling PF. Novel Treponema pallidum serologic tests: a paradigm shift in syphilis screening for the 21stcentury. Clin Infect Dis. 2010 Sep 15;51(6):700-8.
  • Luger A. Diagnosis of syphilis. Bull World Health Organ. 1981;59(5):647-54.
  • Holmes K.K. Sexually Transmitted Diseases / K.K. Holmes, P.F. Sparling, W.E. Stamm; 4th ed. — McGraw-Hill, 2008.

Источник: kdlmed.ru

Показания к проведению

Основная цель анализа – выявить возбудителей сифилиса в крови. Исследование назначают при обследовании:

  • пациентов с клиническими симптомами сифилиса;
  • тесно контактирующих с больным лиц;
  • людей, сдающих кровь на донорство;
  • лиц, которые оформляют медицинскую книжку;
  • пациентов перед операцией;
  • больных перед госпитализацией.

Тест РПГА назначается при планировании беременности для подтверждения или исключения иммунодефицитных, инфекционных и других заболеваний. Анализ помогает выявить:

  • очаговую или диффузную алопецию (облысение);
  • ВИЧ-инфекцию, СПИД;
  • разные формы гепатита;
  • туберкулез;
  • корь;
  • сальмонеллез;
  • клещевой боррелиоз;
  • дифтерию;
  • инфекционный мононуклеоз.

Преимущества метода

Реакция РПГА – чувствительный метод диагностики. Тест помогает с вероятностью до 86% выявить первичный сифилис. При вторичной и третичной стадиях болезни чувствительность возрастает до 95–100%. Методика обладает и рядом других преимуществ:

  • Для проведения теста пациенту необходимо лишь сдать венозную кровь.
  • Исследование биоматериала не занимает много времени. Результат выдается на руки через 24 часа.
  • Диагностика не требует специального оборудования.
  • Сдать РПГА на сифилис можно бесплатно, получив направление в поликлинике по месту прописки. В частных клиниках стоимость анализа варьируется от 250 до 1000 рублей.

Подготовка

Во многих поликлиниках забор биоматериала проводится строго по утрам натощак. После выдачи направления врач порекомендует придерживаться ряда правил:

  • Перед сдачей крови пить исключительно минеральную воду без газа небольшими объемами.
  • Исключить прием пищи позднее 10–12 часов до посещения лаборатории.
  • За 2–3 часа до исследования отказаться от курения.
  • За двое суток до сдачи венозной крови не употреблять алкогольные или спиртосодержащие напитки.
  • Отказаться от приема каких-либо медикаментов. Если это сделать невозможно, предупредить лечащего врача.
  • Об ухудшении самочувствия необходимо сообщить медсестре.

Как проводится анализ

Забор крови производится в поликлинике или в условиях стационара. Процедура состоит из нескольких этапов:

  1. Лаборант подготавливает и маркирует пробирки.
  2. Пациент занимает сидячее положение, закатывает рукав.
  3. Под локоть подкладывается клеенчатый валик.
  4. В области средней трети плеча накладывается жгут.
  5. Лаборант просит пациента несколько раз сжать и разжать кулак. Это обеспечит наполнение вены кровью.
  6. Локтевой сгиб несколько раз обрабатывается дезинфицирующим раствором. Каждый раз ватку меняют.
  7. В самую наполненную кровью вену работник лаборатории вводит иглу.
  8. В шприц набирается нужное количество биоматериала.
  9. Жгут развязывается. На место пункции прикладывается ватка, смоченная в спирте.
  10. Игла аккуратно вынимается из вены.
  11. Чтобы остановить кровь, пациенту рекомендуют согнуть локоть на 1–2 минуты.

Полученный биоматериал доставляют в лаборатории. В кровь добавляют специальную сыворотку с антителами к возбудителю сифилиса и под микроскопом отслеживают процесс агглютинации (склеивания) эритроцитов. Результат РПГА готов через 30 минут после сдачи анализа. В некоторых случаях процедура может занять от 2 до 4 дней.

Расшифровка анализа крови РПГА

Результат диагностического исследования представлен в виде титра антител. Он заносится в бланк направления и может иметь 3 варианта значений:

  • 0,9 – 1,1 – сомнительный, рекомендуется повторная диагностика через 10–14 дней;
  • >1,2 – результат положительный.

Реакция пассивной гемагглютинации будет отрицательной, если исследование было назначено слишком рано. Антитела к возбудителю начинают вырабатываться только на 2-4 неделю после инфицирования. У пациентов, которые ранее перенесли сифилис, РПГА всегда будет положительным, поэтому диагностику не используют для отслеживания динамики лечения.

Примерно в 2,5% случаев данные лаборатории бывают ложноположительными. Низкие показатели титра возможны сразу после вакцинации и при наличии:

  • системных заболеваний соединительной ткани;
  • острого инфаркта миокарда;
  • беременности;
  • менструации;
  • ослабления иммунитета;
  • гепатита разных форм;
  • онкологии;
  • инфекционных заболеваний – ОРВИ, гриппа, оспы.

Источник: vrachmedik.ru

Что это за анализ

РПГА расшифровывается, как реакция пассивной гемагглютинации.

РПГА основана на феномене агглютинации эритроцитов, у которых на поверхности адсорбируются антигены — реагенты РПГА, когда к ним прибавляется сыворотка крови больного сифилисом.

После соединения сыворотки заражённого сифилисом к реагенту РПГА протекает агглютинация (присоединение или склеивание) эритроцитов и их выпадение в осадок. Степень склеивания зависит напрямую от скопления и плотности антител в сыворотке крови, по этой причине РПГА помогает не только выявить наличие антител, но и опознать их количество.

Подразделяют результат на первичное и вторичное инфицирование, выражающееся в проявлении различных антител. При первичном активизируются IgM, при вторичном – IgG. Точность исследования ко второй фазе становится ещё более специфичной. Если на первой фазе она составляет около 96%, то на второй может доходить до 99%.

Анализ хорош в качестве самостоятельного исследования, но лучше употреблять его в качестве подтверждающего метода после положительного неспецифического исследования.

Благодаря своей высокой точности данный анализ всё чаще применяется для подтверждения или опровержения начала поражения больного сифилисом.

Так же, для большей достоверности, после проведения РПГА можно провести другой подтверждающий тест, к примеру, «трепонемный» иммуноферментный.

В целом диагностику всегда проводят комплексно, не пользуясь только лишь 1 видом обследования, а комбинируя различные дополняющие друг друга методы.

Небольшим минусом или, скорее, особенностью анализа является его чувствительность даже после излечения болезни. Результат держится положительным в течение всей жизни переболевшего сифилисом человека. По этой причине РПГА не используется для диагностики болезни раннего или позднего периодов. Так же нельзя с помощью данного анализа выявить эффективность проводимого лечения.

При любом положительном результате существует подозрение на заражение инфекцией. Но периодически может случаться проявление ложноположительной реакции. Правда, её количественное присутствие обычно не превышает 3% и обуславливается рядом причин неинфекционного характера.

В любом случае анализ следует подтверждать проведением других дополнительных исследований.

Посмотрите видео на эту тему

Как проводится исследование

Кровь забирается обычным способом из вены.

Далее медработник смешивает забранный материал с реактивом в стерильной пробирке. Смесь направляется на перемешивание, которое длится около часа.

В случае выпадения осадка эритроцитов результат определяется как положительный.

В такой ситуации полученную сыворотку разводят водой и ставят числовую пробу.

Показания

Несмотря на то, что главным показанием к проведению анализа является подозрение на заражение сифилисом, причин для назначения анализа на самом деле больше.

Среди них можно выделить:

  • выявление признаков заражения основным возбудителем и общая неблагоприятная клиническая картина больного;
  • при увеличении лимфоузлов на фоне появления высыпаний в виде язв;
  • также обследоваться должны родственники и близкие люди, находящиеся в близком контакте с заразившимся, переболевшим или обладающего признаками заражения человеком;
  • обследованию подлежат люди, желающие стать донорами крови;
  • анализ крови РПГА обязателен перед проведением хирургического вмешательства;
  • возможно назначение анализа при годовом профилактическом обследовании;
  • обязательно его проведение оформлении санкнижки;
  • в случае предположения о развитии некоторых других заболеваний — кори, дифтерии, сальмонеллёза, столбняка, коклюша.

Подготовка

Особых мероприятий по подготовке к сдаче анализа не требуется. Важно не курить и не принимать алкоголь накануне обследования, отказаться от приёма пищи за 3-4 часа до начала исследования, пить можно только негазированную воду.

Желательно не волноваться.

Что может повлиять на результат

По причине высокой точности анализа повлиять на него могут некоторые факторы, не всегда относящиеся к заболеванию сифилисом.

Среди них:

  • инфицирование другими видами возбудителей – туберкулёз, мононуклеоз;
  • беременность;
  • заблаговременный приём антибиотиков или начало антибиотикотерапии;
  • заболевания онкологического характера;
  • аутоиммунные аномалии;
  • если ранее пациент имел заражение сифилисом, но прошёл успешную терапию (после первичного заражения результат РПГА носит положительный характер пожизненно).

Какие инфекционные заболевания может определить исследование

РПГА применяется не только для обнаружения возбудителей сифилиса. Зачастую анализ применяется для обнаружения патологий кишечного характера.

На 4 день заражения сальмонеллёзом организмом начинают производиться специфичные антитела, которые обнаруживаются при помощи РПГА.

Так же метод хорош для выявления дифтерийной инфекции и оценки иммунитета после проведённой вакцинации. В данном случае антитела начинают свою активность уже на следующий день после заражения, что значительно ускоряет возможность проведения анализа. По точности и чувствительности метод проведения РПГА обходит даже бактериологический метод.

Анализ крови на РПГА часто применяется и для обнаружения бактериальной дизентерии. При этом его показательность намного выше, нежели у метода лабораторной диагностики посредством бактериального посева. Плюсом такого исследования является дополнительная возможность определения фазы приходящей диареи, в том числе острой и хронической. Так же анализ позволяет отличить шигеллез от нарушений эндокринной системы, колоректального рака и воспалительных процессов в толстой кишке.

При использовании коревого маркера можно обнаружить развитие кори у потенциального больного.

Используется в качестве альтернативы РТГА.

Расшифровка

Метод рпгаРасшифровка анализа крови РПГА, равно как и само проведение исследования выполняется специалистами и медработниками, самостоятельно расшифровать данные титров у непосвящённого человека не получится.

Обычно количественное соотношение свыше 1:640 говорит о развитии инфекции в активной стадии, значение более низкого характера, 1:320, указывает на первичное заражение инфекцией.

Так же проводится аналитическая процедура, в ходе которой на дне лунок микропланшета образуется разного рода скопление материала. Если эритроциты образуют ровный слой, напоминающий зонт, это говорит об утвердительной реакции на сифилис. Если эритроциты локализуются сгруппировано и компактно, образуя своеобразную «пуговку», это указывает на отрицательный результат.

В случае, когда эритроциты собираются в небольшое кольцо с просветом посередине – это говорит о слабоположительной реакции.

Что значит положительный результат?

Главным образом это означает развитие в организме сифилисной инфекции. Но не всегда утвердительный результат говорит только лишь об инфекции.

Метод рпгаСреди причин могут быть:

  • беременность;
  • гепатиты видов В и С;
  • инфаркт в острой форме;
  • сифилис во вторичной, третичной или скрытой фазах;
  • наличие в организме ВИЧ-инфекции;
  • употребление наркотиков в виде инъекций;
  • патологии соединительной ткани;
  • лептоспироз;
  • новообразования злокачественного характера;
  • клещевой боррелиоз;
  • тиф возвратного типа;
  • географические варианты эндемического сифилиса;
  • воспалительные процессы на фоне сифилиса;
  • туберкулёз;
  • бактериальный эндокардит;
  • травмы обширного характера и переломы;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • реакция после проведённой вакцины.

Как действовать в случае установления положительного диагноза?

Выход в случае обнаружения положительного результата один – в срочном порядке нужно обратиться к врачу.

Только после всестороннего обследования специалист сможет составить полную картину о прогрессирующем заболевании и назначить медикаментозное и дополнительное лечение.

Медикаментозное лечение подразумевает применение разного спектра антибиотиков – пенициллина, эритромицина или тетрациклина. В тяжёлых случаях добавляют пиротерапию, в ходе которой искусственным образом повышают температуру тела больного, и внутримышечные инъекции антибактериальных препаратов. При протекании третичного сифилиса могут применяться высокотоксичные препараты, основанные на добавлении висмута, как дополнение к антибиотикам.

Лечение проходит как сам заразившийся, так и его близкие родственники и люди, имевшие с больным в недавнем времени контакты различного характера.

Вся домашняя мебель, утварь и предметы личного плана проходят дезинфекцию.

Народная терапия в данном случае не может быть эффективной, поэтому практически не применяется.

Ложноположительные результаты

Причинами появления неопределённого или ложноположительного результата могут быть следующие параметры:

  1. Беременность;
  2. Наличие менструации на момент проведения анализа;
  3. Начальный период после проведения вакцинации;
  4. Недавно перенесённый инфаркт миокарда;
  5. Недавно перенесённые или ныне развивающиеся заболевания инфекционного характера (ВИЧ-инфекция, грипп, оспа, гепатит, респираторные инфекции);
  6. Онко- и аутоиммунные заболевания;
  7. Патологии печени, почек и других внутренних органов.

Альтернативы анализа РПГА

Ни одна из методик не даёт 100% гарантии точного результата. Отклонения в отдельных случаях могут доходить до 10%.

По этой причине врач назначает комплексное обследование, включающее в себя несколько видов исследования.

Серологический анализ – включает в себя неспецифические и специфические тесты.

Подобный вид анализа полезен при недостаточной симптоматике или при её отсутствии.

Неспецифические тесты – это:

  • микрореакция преципитации – используется по истечению одного месяца после заражения;
  • реакция Вассермана – используется по истечению 6 недель после начала инфицирования.

Для обоих видов забирается кровь из пальца, спинномозговая жидкость.

Специфические тесты – это:

  • реакция иммунофлюоресценции – подходит для ранних стадий заболевания, в качестве материала используется капиллярная кровь или из вены;
  • иммуноферментный анализ – один из самых точных видов анализа, используется после выполнения неспецифических тестов либо в качестве комплексной диагностики;
  • реакция иммобилизации бледных трепонем – ещё один распространённый и точный анализ, применяется только спустя 4 месяца после заражения, материал забирается из вены;
  • иммуноблотинг – является новым методом, используемым для подтверждения результатов других анализов, очень точен, но обладает высокой стоимостью.

Метод рпга

Лабораторный анализ – быстрый и относительно недорогой метод исследования. В качестве материала используются пробы язв и эрозий, грудное молоко, сперма.

При наличии отрицательного результата проводят дополнительный анализ, порой не один раз.

Анализ РПГА можно назвать довольно широко применяемым методом диагностирования инфекционных и бактериологических аномалий. Заболевания подобного характера весьма опасны как для организма самого больного, так и для окружающих его близких людей. По этой причине важно своевременно обращаться к врачу со времени появления первых признаков болезни для пресечения распространения недуга и перехода его в хроническую форму.

Источник: 1pokrovi.ru

РПГА

Реакция пассивной гемаглютинации — один из наиболее специфических и чувствительных серологических методов диагностики сифилиса.

Основные характеристики и особенности проведения РПГА указаны в таблице.

Характеристика Описание
Материал исследования Образец венозной крови
Механизм действия Реакция непрямой гемагглютинации развивается в случае, если эритроциты – красные кровяные клетки, на поверхности которых располагаются антигены бледной трепонемы, склеиваются при контакте сыворотки крови зараженного сифилисом человека
Эффективность Исследованиями доказано, что по специфичности и чувствительности реакции к возбудителю заболевания данный метод является одним из самых точных серологических анализов
Расшифровка и положительный результат При добавлении к исследуемому биологическому материалу сыворотки с антителами к трепонеме наблюдается агглютинация (склеивание) эритроцитов, выпадающих в осадок в виде зонтика. Также на количество агглютинированных эритроцитов влияет концентрация сывороточных антител. Положительная реакция РПГА свидетельствует о присутствии Treponema pallidum в крови обследуемого
Показания для проведения исследования Лечащий врач назначает сдачу анализа крови на РПГА в следующих случаях:

  • клинические проявления сифилиса (твердый шанкр, «ожерелье Венеры», гуммы и т. д.);
  • отсутствие клинических проявлений, но возможное инфицирование вследствие контакта с больным человеком;
  • подготовка к донорской сдаче крови;
  • возникновение необходимости прохождения обследования для оформления или продления медицинских книжек;
  • дообследование пациентов с положительной реакцией скринингового теста;
  • госпитализация пациента в стационар и предоперационное обследование
Чувствительность
  • на стадии первичного сифилиса порядка 80%;
  • вторичного и третичного – 90-98%
Специфичность Высокая специфичность (98-100%) дает возможность назначать анализ для подтверждения сифилиса в случае положительной реакции микропреципитации или других аналогичных обследований
Ложные результаты Частота ложноположительных результатов относительно невелика и по данным различных исследователей составляет порядка 0,05-2,5%.

Возникновение ложноположительных результатов у лиц, не инфицированных сифилисом, связано со следующими факторами:

  • наличие системных заболеваний соединительной ткани;
  • аналогичные бледной трепонеме возбудители в сыворотке пациента;
  • соматические заболевания (инфаркт миокарда, гепатиты различной этиологии и пр.);
  • ВИЧ-инфекция;
  • обширные травмы и переломы;
  • беременность;
  • инъекционный прием наркотических средств;
  • онкопатологии и др.
Отрицательный результат Может быть получен в случае, если:

  • человек здоров;
  • анализ проведен некорректно;
  • анализ проведен в течение первых 2-4 недель, когда антитела не определяются

Если человек хотя бы раз был болен сифилисом, реакция РПГА будет оставаться положительной в течение всей его жизни.

Для того, чтобы избежать ложноположительных результатов, нужно придерживаться следующих рекомендаций при подготовке к сдаче анализа:

  • забор материала проводится строго натощак;
  • в день сдачи крови разрешается пить негазированную минеральную воду в минимальном объеме;
  • перед проведением анализа на несколько часов следует отказаться от курения и полностью исключить прием алкогольных напитков;
  • в случае, если пациент принимает лекарственные препараты, ему надо уведомить об этом своего лечащего врача.

При получении положительного результата показано немедленное обследование членов семьи и половых партнеров инфицированных лиц с целью предотвращения дальнейшего распространения инфекции.

Источник: noprost.com

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе — амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество — позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

  1. 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2Получение быстрого ответа;
  3. 3Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3Злокачественные новообразования.
  4. 4Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6Беременность.
  7. 7Употребление алкоголя.
  8. 8Приём жирной пищи.
  9. 9Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

8. Реакция микропреципитации

Так как трудоёмкость выполнения вышеуказанных проб велика, то для широты обхвата диспансеризацией разных групп населения разработан ускоренный способ серодиагностики сифилиса, так называемый экспресс-метод – реакция микропреципитации (сокращенно МР, РМП).

Она выполняется с кардиолипиновым антигеном и вспомогательными веществами. Его преимуществом является забор периферической крови для исследования. Это значительно ускоряет и саму методику, и работу лаборантов.

Для проведения МР необходимы плазма или инактивированная сыворотка крови пациента (именно они содержат антитела). Далее плазму помещают в маркированные лунки. Затем, к исследуемому материалу добавляют каплю кардиолипинового антигена, смешивают и встряхивают. В итоге в сыворотке инфицированного появляются характерные хлопья, разные по степени интенсивности.

Это качественная проба. При количественной оценке используются 10 разведений сыворотки, помещаемой в 10 лунок с соответствующей маркировкой. При качественной МР ответ указывается в виде крестов (плюсов) или минуса, при количественной указывается титр антител (1:2, 1:4 и так далее).

Наличие хлопьев расценивается как положительный или слабоположительный ответ. Возможно появление флокулята и при отсутствии заболевания, поэтому окончательную оценку полученного результата проводят после контрольного исследования или проведения других реакций (РИБТ, РИФ, ИФА, РПГА).

9. VDRL

Рекомендованный Всемирной организацией здравоохранения метод постановки реакции с антигеном липоидной природы (АГ) по праву считается лучшим среди других стандартных нетрепонемных тестов. Разработан в США, штате Джорджиа в лаборатории венерических болезней (Veneral Diseases Research Laboratories).

Аббревиатура учреждения послужила названием для пробы – VDRL. VDRL — это модификация МР. Сыворотку от больного сифилисом инактивируют и помещают на предметное стекло. Используемый антиген состоит из кардиолипина, холестерина и лецитина в разном процентном соотношении. Ответ регистрируется практически сразу.

Отчётливая флокуляция возникает в присутствии в сыворотке антител. Сыворотка становится реактивна по прошествии 4-х недель после заражения. Для оценки количества антител, сыворотку предварительно разводят в геометрической прогрессии.

Преимущества VDRL:

  1. 1сравнительно высокая чувствительность;
  2. 2сравнительно высокая специфичность;
  3. 3легкость выполнения;
  4. 4малая стоимость реактивов;
  5. 5получение быстрого ответа.

Недостатком VDRL является относительно высокая частота ложноположительных результатов.

Их причинами являются всё те же перечисленные выше заболевания.

Трепонемные тесты исполняются со специфическими АГ Treponema pallidum. Они необходимы и обязательны для установления окончательного диагноза. Это реакция иммунофлюоресценции (РИФ), реакции непрямой гемагглютинации (РПГА), иммуноферментный анализ (ИФА) и др.

После положительного результата нетрепонемного теста (RPR, MP, VDRL) всегда должны выполняться трепонемные (чаще комбинация — РПГА, ИФА, РИФ).

Трепонемные тесты более сложны в исполнении, чем экспресс-тесты, и требуют больших затрат денежных средств.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные — более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

  1. 1От 0 до 20 — отрицательная проба.
  2. 2От 21 до 50 — слабоположительная проба.
  3. 3От 50 до 100 — положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

15. Клиническая оценка результатов лабораторной диагностики сифилиса

В таблице 1 ниже мы привели возможные результаты анализов и их расшифровку. Как можно видеть в таблице, основное значение при расшифровке имеет комплексная оценка тестов.

Оценка реактивности тестов выполняется также «крестами»:

  1. 1Максимальный ответ (резко положительная проба) обозначается с помощью 4-х крестов.
  2. 2Положительная проба обозначается с помощью 3-х крестов.
  3. 3Слабоположительную реакцию обозначают двумя крестами.
  4. 4Один крест свидетельствует о сомнительном и отрицательном результате.
  5. 5Отрицательный ответ маркируют знаком «минус».

Проблема оптимизации лабораторной диагностики сифилиса не потеряла свою актуальность до настоящего времени. Современные методы диагностики, несмотря на стремление учёных привести диагностику к максимально высоким показателям чувствительности и специфичности, требуют контрольной проверки и индивидуального подхода.

Особенностью сифилитической инфекции является феномен серорезистентности, который так и не получил научного объяснения. Диагноз выставляется после полноценного обследования больного эпидемиологическими, клиническими, лабораторными методами.

На фоне экономико-технического развития медицины наблюдается и прогресс в разработке новых критериев диагностики сифилиса. Всё это позволит быстро, успешно и безошибочно лечить пациентов.

Источник: sterilno.net

Метод рпга

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.