Современные тесты для проведения РПГА

Сейчас для проведения РПГА пользуются стандартизированными тест-наборами.

В них есть все необходимое для анализов:

  • Флакон с эритроцитами, которые на поверхности содержат антигены бледной трепонемы штамма Nichols.
  • Такая же емкость, но уже с «чистыми» красными кровяными тельцами (нужны для контроля).
  • Буферный раствор для разведения сыворотки пациента (ниже расскажем, зачем это делают).
  • Сыворотка от человека, заведомо больного сифилисом, тоже используется для контроля (К+).
  • Сыворотка от заведомо здорового человека (К–).
  • Пластиковая планшетка с пронумерованными луночками для смешивания образцов и оценки результатов.

лунки пронумерованные для РПГА

Каждый тест набор содержит запас реактивов для постановки определенного числа проб. Обычно – 100. Поэтому сыворотку иногда сохраняют, пока не наберется нужное число образцов для исследования.

Методика проведения анализа РПГА

Реакция пассивной гемагглютинации может предоставить два типа результатов:


  • Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли в исследуемом образце антитела к возбудителю.
  • Количественный. Позволяет оценить интенсивность синтеза иммуноглобулинов и таким образом отследить активность инфекции.

Как правило, сначала проводится качественная оценка, а положительные образцы отбираются для количественных исследований.

Алгоритм простого выявления инфицированности таков:

  • В лунки планшета вносятся одинаковые дозы исследуемых образцов. На одного пациента выделяется ряд из шести лунок.
  • В первые две капают его плазму, разведенную буфером 1:20.
  • Следующая пара служит для контроля, в нее помещают сыворотку К+. И еще две лунки для материала К–.
  • Затем вносят меченные антигеном эритроциты в первую лунку из каждой пары. Во вторую – эритроциты чистые.
  • Планшет некоторое время покачивают для тщательного перемешивания реактивов и оставляют в покое. Минимум – 45 минут. Можно и на всю ночь.

Результаты оцениваются визуально. Если реакция отрицательная, эритроциты оседают на дно сферического углубления лунки.

кровь на сифилис в лунках


Это должно произойти в обеих лунках с образцами пациента и там, куда были добавлены чистые контрольные эритроциты тест-системы.

При положительном результате, эритроциты не собираются в одном месте, а равномерно распределены по всему дну лунки. Подобная картина должна быть там, где меченые стандартным антигеном эритроциты смешиваются с образцом больного и сывороткой К+. Таким образом проводится контроль реакции, что позволяет избежать ложных результатов.

Количественная оценка РПГА

Образцы с положительным результатом отбирают и несколько раз разводят буферным раствором (титруют). Перед каждым разведением, сыворотку капают в соответствующую лунку планшета и отмечают над ней степень суммарного разведения. Затем к образцам добавляют эритроциты с антигеном трепонемы и определяют, при каком титре еще отмечается положительный результат. Это – количественный анализ крови на сифилис РПГА, он показывает концентрацию антител к возбудителю.

Результаты оценивают так:

  • 4+ означает, что эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем. Появление складчатости края говорит о высоких концентрациях антител в исследуемом образце. Реакция положительная.
  • 3+ ставят, если круг четкий, но часть эритроцитов «стекает» к центру. Картина напоминает расправленный зонтик, расценивается как положительная реакция.

количественный РПГА на сифилис

  • 2+ выглядит как широкое кольцо с тенденцией к просветлению в центре. Слабоположительная.
  • 1+ означает сомнительный результат. В лунке – узкое колечко. Требует повтора через 1-2 недели.
  • При отрицательном анализе, эритроциты формируют пуговку в центре лунки.

Есть, правда, серорезистентные случаи сифилиса, при которых болезни уже вроде бы нет, а антитела сохраняются длительное время. Поэтому РПГА иногда требует подтверждения другими методами.

При необходимости сдать РПГА и пройти любое обследование на сифилис, обращайтесь к грамотным венерологам.

Источник: prosifilis.ru

Что такое РПГА

РПГА является реакцией пассивной гемагглютинации, а если точнее — анализом для выявления этого процесса. В ходе исследования легко можно обнаружить антигены бледной трепонемы, именно этот микроорганизм провоцирует сифилис. Если человек полностью здоров, бледная трепонема, попав в организм, провоцирует ответную реакцию со стороны иммунной системы — выработку особых антител. По их наличию и определяется, есть заболевание или нет.

Все лабораторные исследования на сифилис делятся на два типа:

  • специфические;
  • неспецифические.

Всё зависит от того, какие именно антитела присутствуют в крови. РПГА относят к специфическому типу анализа для выявления возбудителей сифилиса. Впервые такие исследования стали проводить в 1965 году, РПГА оказался настолько точным анализом, что быстро стал наиболее популярным среди остальных методик диагностики сифилиса. Исследование позволяет выявить болезнь на любой стадии, включая латентную.


Однако в некоторых случаях РПГА может дать ложную положительную реакцию. Это может случиться из-за наличия некоторых вирусных заболеваний или при сниженном иммунитете после какой-либо болезни.

Насколько анализ достоверен?

Если человек заразился сифилисом, выявить болезнь можно не ранее чем через 2-4 недели — только на этом сроке начинают вырабатываться антитела к возбудителю. Иногда инкубационный период может длиться более месяца. РПГА, анализ крови, при ранней диагностике имеет точность 86%. Начальная стадия заболевания самая «неуловимая» для этого типа исследования. А вот на следующих стадиях сифилиса и у носителей латентного вируса, точность диагностики повышается до 99-100%.

Это позволяет применять РПГА как дополнительное исследование для подтверждения уже имеющегося диагноза или при положительных результатах других анализов (нетрепонемного типа). РПГА всё чаще используют для скрининга, но при положительных результатах так или иначе проводят ещё одно специфическое исследование.

Реакция рпга

Кто в зоне риска

Для проведения РПГА требуется направление от врача. Направить пациента на анализ могут в нескольких случаях:


  1. Если имеются видимые признаки болезни. Сюда относятся язвы на коже, увеличенные лимфоузлы, частичное облысение волосяного покрова и пр.
  2. Если у пациента был прямой контакт с больными сифилисом, для профилактики ему также необходимо пройти обследование.
  3. Все доноры, сдающие кровь, обязаны проверяться на сифилис перед процедурой.
  4. Для оформления санитарной книжки или ежегодных профосмотров на предприятиях также потребуется пройти необходимые обследования.
  5. Если скрининг дал положительный результат.
  6. На сифилис проверяют каждого, кого готовят к госпитализации в стационар.
  7. Обследование пациента перед любой операцией также требует прохождения обследования.

Врач может назначить РПГА не только при подозрении на сифилис или для планового осмотра, но и для диагностики следующих заболеваний:

  • дифтерии;
  • дизентерии;
  • сальмонеллеза.

Как проводится анализ

Для проведения РПГА берётся кровь из вены, полученный образец отправляют на исследование. Чтобы результаты были максимально точны и не искажены, важно правильно подготовиться к процедуре. Чтобы не пришлось сдавать кровь заново, необходимо руководствоваться следующими правилами перед визитом к специалисту:

  1. Кровь сдаётся ранним утром до 8-10 часов.
  2. Нельзя завтракать, пить чай или кофе, допустимо только употребление небольшого количества воды. Желательно, чтобы последний приём пищи был за 10-12 часов до анализа.

  3. Хотя бы за полчаса до обследования нельзя курить, но лучше всего сделать перерыв между сигаретами в 4-6 часов.
  4. В день анализа и минимум за сутки до него нельзя пить алкогольные напитки любой крепости.
  5. Если есть необходимость по графику принимать лекарства, об этом обязательно нужно сказать врачу, если нет возможности немного перенести это по времен.
  6. При плохом самочувствии или слабости нужно обязательно предупредить медсестру, которая забирает кровь для анализа, или врача.

К подготовке важно относиться ответственно, поскольку от результатов анализа зависит многое, в особенности точная постановка диагноза.

Ошибки в диагностике и назначение неверного лечения могут привести к плачевным последствиям.

Когда ждать результатов

Чтобы РПГА анализ дал наконец положительную или отрицательную реакцию на сифилис, должно пройти определённое время. Положительная реакция может проявиться через месяц после заражения, однако на первичной стадии показатели титров одни из самых низких — менее 1:320. На вторичной стадии показатели увеличиваются, а вот при латентном сифилисе анализы будут такими же, как и в самом начале развития заболевания.

Когда точно определена стадия сифилиса, назначается лечение в виде курса препаратов. Но даже после излечения от заболевания, анализы РПГА могут давать положительные результаты на сифилис. Это случается в большинстве случаев, положительный анализ у людей, вылечившихся от сифилиса, может быть в течение всей оставшейся жизни.

Есть случаи, когда положительные реакции на сифилис вызваны совершенно иными причинами. Такие результаты анализа называют ложноположительными, чаще всего такие реакции бывают:


  • у беременных;
  • во время менструации;
  • если недавно была вакцинация;
  • если был инфаркт миокарда незадолго до обследования;
  • при инфекционных заболеваниях (оспа, грипп, ОРВИ, ВИЧ, гепатит (вирусный) и пр.);
  • при онкологии;
  • при ослаблении иммунитета;
  • у больных с патологиями внутренних органов.

Исследование РПГА для диагностики других инфекций

Реакция РПГА позволяет выявить не только сифилис, но и ряд других инфекционных заболеваний. Сдавать кровь понадобится, например, людям с подозрениями на острую кишечную инфекцию (сальмонеллез).

Болезнь провоцируют сальмонеллы, попадающие в организм человека. По мере развития сальмонеллеза постепенно разрушается структура ЖКТ, а также происходит сильная интоксикация. Основными симптомами кишечной инфекцией являются:

  • рвота;
  • диарея;
  • изменение запаха стула, а также появление в нём слизи или кровавых выделений;
  • боль в животе;
  • высокая температура;
  • озноб;
  • плохое самочувствие;
  • обезвоживание и пр.

Ещё одним заболеванием, для выявления которого можно применять РПГА, является корь. Она характеризуется поражениями слизистых глаза, ротовой полости и дыхательных путей. Кроме этого явными признаками болезни является сыпь на всём теле пациента, а также сильная интоксикация. Последняя сопровождается рвотой, нарушениями стула, нарушением водного баланса в организме и пр.

Исследование РПГА также может выявить столбняк, который является острой инфекцией.

Возбудитель этого заболевания легко проникает в организм через царапины, раны, порезы, ожоги и пр. Также можно заразиться столбняком, если в больницах или при косметических процедурах использовались нестерильные инструменты и материалы. Главными симптомами, по которым можно выявить столбняк, являются:

  • тонус мышц;
  • слабость;
  • раздражительность;
  • плохой аппетит;
  • апатия;
  • судороги в мышцах лица;
  • если столбняк следствие травмы, может ощущаться тянущая вокруг повреждённого участка тела;
  • затрудняется глотание воды и пищи.

Исследование РПГА также применяется для выявления коклюша на любой стадии. Это очень важно, поскольку на начальной стадии заболевания нет чётких симптомов, позволяющих его диагностировать. Подозрения на инфекцию чаще всего появляются уже на более поздних стадиях.

При коклюше может быть повышенная температура, однако точно так же она может оставаться в пределах нормы и не превышать стандартные 36,6. Позже у больного появляется кашель, приступы которого постепенно становятся всё чаще и сильнее.


Итак, реакция пассивной гемагглютинации является крайне эффективным методом диагностики сифилиса. Несмотря на то, что чаще всего РПГА используют для выявления антител бледной трепонемы, с помощью этого анализа можно установить наличие и других инфекций — кори, коклюша, сальмонеллеза и пр. Чтобы результаты исследования были максимально чёткими, важно правильно к ним готовиться и соблюдать все необходимые условия.

Источник: perelomu.net

Справка о сифилисе

Сифилис – хроническое инфекционное ЗППП, вызываемое бледной трепонемой. Бледная трепонема – микроорганизм из порядка спирохет, которые представляют собой бактерии в виде спиралей.

Есть несколько путей заражения сифилисом:

  1. Прямой (половой), преобладающий.
  2. Косвенный (бытовой).
  3. Трансплацентарный (от женщины к плоду).

Сифилис принято разделять на несколько этапов:

  1. Инкубационный период.
  2. Первичный сифилис.
  3. Вторичный сифилис.
  4. Третичный сифилис.

Инкубационный период длится около двух недель, при этом нет никаких видимых признаков заражения. Бледная трепонема в этот момент активно осваивается в организме, размножается. Вследствие этого на коже/слизистой, в том месте, через которое попали микроорганизмы, формируется первичный очаг.

Первичный очаг представляет собой узелок, твердый и безболезненный, характерно его покраснение. Такое образование, иначе именуемое твердым шанкром, указывает на начало первичного сифилиса. По прошествии некоторого времени (до 2-3 недель) поражаются ближайшие лимфоузлы.


Внимание! В инкубационном периоде и в начале (2-3 недели) первичного сифилиса бледная трепонема в крови не обнаруживается, так как она еще не успела попасть в системный кровоток. Анализ крови на данном этапе неинформативен.

Во время вторичного сифилиса на коже больного обнаруживаются множественные высыпания. Они могут быть разных форма и размеров, называются сифилидами. В каждом таком сифилиде содержится огромное количество трепонем, потому период считается самым заразным.

В настоящее время редко встречается последняя стадия, так как она развивается лишь через годы от момента заражения. Кроме того, заболевание вполне успешно поддается лечению, если проходить терапию на первых этапах.

Во время третичного сифилиса поражаются внутренние органы и системы, это может приводить к летальному исходу. Для этого периода характерны гуммы – особые отграниченные зоны воспаления, которые имеют хронический характер. Эта стадия практически не несет опасности для окружающих.

Проанализировав все вышесказанное, можно выделить несколько критериев, которые влияют на выраженность и локализацию поражения:

  • путь проникновения трепонемы в организм;
  • стадия заболевания;
  • время начала лечения и сам подход к терапии.

Какие существуют методы для выявления сифилиса?

Есть много анализов, которые позволяют выявить бледную трепонему или следы ее присутствия. Разные тесты могут использоваться на разных этапах. Существуют также менее информативные, т.н. скрининговые тесты и более подробные – специфические.

Можно рассматривать другую классификацию тестов:

  • прямые;
  • непрямые.

Прямые тесты обнаруживают микроорганизм или его ДНК, а непрямые лишь косвенные признаки наличия паразита в крови.

РПГА

РПГА относят к специфическим непрямым тестам. РПГА – серологическая реакция, т.е. основання на взаимодействии антитела с подходящим к нему антигеном. Этот метод считается одним из самых чувствительных.

Серологические реакции проводятся специалистами, однако существуют аналогичные тесты для домашнего проведения анализов. К ним прилагается инструкция, которую необходимо тщательно соблюдать, чтобы не нарушать результатов.

При наличии положительного анализа не следует предаваться панике: тест может выдавать ложноположительный результат.

РПГА служит для выявление антител сыворотки крови, которые образовались в ответ на проникновение бледной трепонемы в кровь. Определение антител проводят с помощью эритроцитарного диагностикума.

Эритроцитарный диагностикум представляет сбой эритроциты с адсорбированными на них антигенами к соответствующим антителам.

Если антитела сыворотки крови соединятся с антигенами, то произойдет и опосредованное склеивание эритроцитов, а в пробирке/лунке будет образовываться хлопьевидный осадок.  Если же осадок не образуется, значит, реакция отрицательная и человек не болен сифилисом.

Виды РПГА

Есть два способа постановки РПГА:

  1. Качественный
  2. Полуколичественный

Качественная реакция – собственно описанная реакция пассивной гемагглютинации. При положительном результате (выпадение осадка) врач назначает уточняющее полуколичественное исследование тем же методом, но может провести и другой анализ: иммуноферментный (ИФА), полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

Анализ на сифилис РПГА полуколичественный подразумевает исследование нарастания/снижения титра антител с течением времени. Обычно отслеживают изменения с периодичностью раз в неделю в течение четырех недель.

Если титр нарастает с течением времени хотя бы в 4 раза, то диагноз подтверждается. Следует отметить, что у пациентов, прошедших лечение по поводу сифилиса, высокие титры антител могут сохраняться годами и десятилетиями. Цена РПГА составляет в среднем около 500 рублей, но варьирует в разных клиниках, лабораториях и городах.

Видео в этой статье продемонстрирует, как проводят анализ на сифилис РПГА полуколичественно.

Источник: ZPPP.su

51. Реакция коагглютинации. Механизм, компоненты. Применение.

Реакцию коагглютинации применяют для определения антигенов с помощью антител, адсорбированных на белке А клеток стафилококка (антительный диагностикум).

Белок А имеет сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, поэтому такие бактерии, обработанные иммунной диагностической сывороткой неспецифически адсорбируют антитела сыворотки, которые затем взаимодействуют активными центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных. В результате коагглютинации образуются хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.

Механизм. Основан на том, что находящийся на поверхности золотистого стафилококка белок А селективно реагирует с Fc-фрагментом IgGl, G2, G4, оставляя свободными антидетерминанты Ат, которые, взаимодействуя с гомологичным Аг, вызывают агглютинацию стафилококков. Для постановки КОА применяют коммерческие стафилококковые реагенты, содержащиеся в ампулах или высушенные в лунках полистироловых пластин или предметных стекол. К реагенту добавляют 0,01-0,1 мл исследуемой культуры или растворимого Аг, инкубируют при комнатной температуре 10-30 мин (в условиях постановки реакции на стекле) или 18 -20 ч (в условиях постановки реакции в капиллярах). Учет проводят так же, как при обычной РА. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча­ется в разведении, близком к титру диагнос­тической сыворотки. Одновременно учитыва­ют контроли: сыворотка, разведенная изото­ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка.

52. Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) — метод идентификации вируса или выявления противовирусных антител в сыворотке крови больного, основанный на феномене отсутствия агглютинации эритроцитов препаратом, содержащим вирус, в присутствии иммунной к нему сыворотки крови.

Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) основана на блокаде, подавлении антигенов вирусов антителами иммунной сы­воротки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.

РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещево­го энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Механизм. Типирование вируса проводят в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) с набором типоспецифических сывороток. Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса А с антигенами H0N1, H1N1, Н2N2, H3N2 и др. могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток.

Источник: StudFiles.net

Реакция рпга

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.