ЦЕЛЬ: диагностическая, обнаружение малярийных плазмодиев в крови

ОСНАЩЕНИЕ:

1. 70% раствор спирта этилового и эфир медицинский.

2. Предметные стёкла, обезжиренные смесью Никифорова.

3. Бланки направлений, авторучка.

4. Стеклограф.

5. Спички.

6. Круглая резинка.

7. Конверт из крафт-бумаги.

8. Лоток для сброса.

9. Ёмкость с дезинфицирующим раствором.

10. Стерильные: лоток, индивидуальные перья-копья, пинцет, ватные шарики.

ПОДГОТОВКА ПАЦИЕНТА И МЕДИЦИНСКОГО РАБОТНИКА:

1. Установить доверительные отношения с пациентом.

2. Объяснить пациенту цель и ход процедуры, получить его согласие.

ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ:

1. Вымыть и осушить руки.

2. Надеть перчатки и маску.

3. Обработать кожу IV пальца руки пациента спиртом с эфиром.

4. Вскрыть перо – копье, проверив срок годности.

5. Проколоть мякоть латеральной фаланги IV пальца индивидуальным пером-копьём.


6. Поместить перо в лоток для сброса.

7. Снять первую каплю крови сухим ватным шариком.

8. Поместить шарик в ёмкость с дезинфицирующим раствором.

9. Повернуть палец проколом вниз.

10. Прикоснуться предметным стеклом ко второй капле крови в двух местах (при необходимости взять 2 — 3 стекла).

11. Приложить ватный шарик со спиртом к месту прокола.

12. Размазать каплю крови на предметном стекле в диск диаметром 10-15 мм углом второго предметного стекла.

13. Обвести толстую каплю крови стеклографом с обратной стороны стекла.

14. Указать регистрационный номер с обратной стороны стекла.

15. Высушить препарат на воздухе в горизонтальном положении, предохраняя от пыли и мух.

16. Поместить стекло с толстой каплей между двумя предметными стёклами, используя спички и круглую резинку.

17. Поместить препарат в конверт.

ЗАВЕРШЕНИЕ:

1. Оформить направление в паразитологическую лабораторию.

2. Отправить конверт в лабораторию сразу же.

3. Провести дезинфекцию использованного инструментария и оснащения:

· Перо- копьё замочить в 5% растворе хлорамина на 60 минут, затем утилизировать.

· Тампон и марлевую салфетку замочить в 5% растворе хлорамина на 60 минут, а затем утилизировать.

· Лоток обработать двукратным протиранием 3% хлорамином с интервалом 15 минут или погрузить в раствор на 1 час.


· Снять перчатки, опустить в 5% раствор хлорамина на 1 час, затем утилизировать.

4. Снять маску.

5. Вымыть и осушить руки.

ИНСТРУКЦИЯ ПО ЗАБОРУ МАТЕРИАЛА

ПРИ ПОДОЗРЕНИИ НА ЗАБОЛЕВАНИЕ ХОЛЕРОЙ.

ПОМНИ! Испражнения и рвотные массы для лабораторного исследования нужно брать немедленно при выявлении больного и обязательно до начала лечения. Вся посуда для проведения забора материала должна быть стерильной, проверена на целостность и подписана до начала забора материала.

ОСНАЩЕНИЕ:

1. Защитный костюм 4-го типа.

2. Стерильная банка с плотной крышкой.

3. Стерильная ложка или шпатель.

4. Емкости для дезинфицирующих растворов и ветошь.

5. Направление, ручка.

6. Целлофановые пакеты и крафт-бумага.

7. Контейнер или бикс для транспортировки.

8. Спирт 70%

9. Резиновое кольцо или шпагат.

10. Лейкопластырь или липкая лента.

ПОДГОТОВКА МЕДИЦИНСКОГО РАБОТНИКА:

1. Приготовить необходимое оснащение.

2. Заполнить направление, завернуть его в целлофановый пакет и положить в бикс.

3. Промаркировать емкости: «1% хлорамин», «3% хлорамин».

4. Надеть защитный костюм 4 типа (длинный медицинский халат, перчатки, шапочку, клеенчатый фартук, маску).

5. Развести хлорамин в 2-х ёмкостях: 3% и 1%.

ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ:


ПОМНИ! Материал для исследования на холеру берется только из судна или других ёмкостей для сбора испражнений.

1. Взять стерильные ёмкости (баночки) для сбора испражнений с плотными крышками, промаркировать их.

2. Набрать из судна (лотка, таза) испражнения или рвотные массы стерильным шпателем или ложкой до 50 мл.

3. Положить шпатель (ложку) в ёмкость с 3% раствором хлорамина.

4. Наружную поверхность ёмкости (баночки) протиреть ветошью, смоченной в 1% хлорамине.

5. Плотно закрыть крышкой, обернуть крышку крафт-бумагой или поместить в целлофановый пакет, закрепив резиновым кольцом.

6.  Поместить емкости с материалом в контейнер или бикс.

7. Обработать руки в перчатках 1% раствором хлорамина.

8. Закрыть контейнер (бикс), обработать 1% раствором хлорамина и заклеить лейкопластырем или липкой лентой.

9. Обработать руки в перчатках 1% раствором хлорамина.

10. Промаркировать контейнер: «ВЕРХ», «НЕ ОТКРЫВАТЬ!».

ЗАВЕРШЕНИЕ:

1. Бикс отправить в бактериологическую лабораторию ЦГСЭН под роспись (3 этаж) с медицинским работником, прошедшим инструктаж. Во время транспортировки бикс не открывать, не болтать и не переворачивать. После доставки материала контейнер (бикс) обрабатывается и доставляется в отделение.

2. Провести дезинфекцию испражнений пациента: засыпать сухой хлорной известью 1: 5, экспозиция 1 час.

3. Провести обработку фартука 3% хлорамином.

4. Снять загрязненные перчатки и погрузить их в 5% хлорамин на 1 час, затем утилизировать.

5. Обработать руки 70% спиртом, надеть стерильные перчатки и начать оральную регидратацию.

6. После ее проведения провести обработку инструментария и рабочего места.

 

Источник: studopedia.ru

«Толстая капля» малярийного плазмодия


Основой лабораторной диагностики в выявлении малярийного плазмодия является микроскопия крови. Этот метод называется «толстая капля». Данное исследование считается достоверным и не очень затратным, но трудоемким. Биоматериал на малярию рекомендуется брать у пациента именно в момент приступа лихорадки, так как именно в этот момент вероятность обнаружения плазмодия наиболее высока. После взятия делаются мазки и оцениваются под микроскопом. При присутствии паразита эритроциты значительно увеличены, могут иметь на поверхности зернистость. Данный тест на малярию может достоверно обнаружить не только самого возбудителя, но и вид паразита, а также стадию развития заболевания.

Помимо толстой капли, исследуется тонкий мазок крови. Метод проводится так же, как и в предыдущем случае, оцениваются морфологические изменения эритроцитов. Проделывается он для подтверждения и не является основным.

Затем биоматериал отправляется на иммуноферментный анализ (ИФА), в котором будут определяться антитела к возбудителю, и на полимеразную-цепную реакцию (ПЦР). Последнее исследование является самым достоверным, так как определяет непосредственно генетический материал возбудителя, но такой тест на малярию является самым дорогим.


Еще к основным диагностикумам для определения инфекции относят общий анализ крови и мочи. При данной болезни в результате будет интерпретироваться прогрессирующий воспалительный процесс, проходящий в организме. А также будут признаки анемии. Это сниженный гемоглобин и сниженное количество эритроцитов, что говорит о захвате их паразитом. А вот лейкоциты и тромбоциты будут значительно повышены – это свидетельствует о воспалении.

С помощью общего анализа мочи можно обнаружить гемоглобин, а также эритроциты. В сочетании с общим анализом крови врач уже может подозревать такое заболевание, как малярия.

В дополнение могут назначить биохимическое исследование, в котором при инфекции будет наблюдаться повышенное количество трансаминаз, альбумина и билирубина. С-реактивный белок также дает положительный результат.

Паразитологический метод

Паразитологический метод направлен на выявление половых и бесполых форм паразита посредством исследования крови. Диагностика болезни паразитологическим способом включает в себя два исследования. Это «толстая капля», является основным, по результатам которого врач может выставить диагноз, и «тонкий мазок».

«Толстая капля»

Суть заключается в том, что обрабатывается большое количество крови за один промежуток времени.


предметное стекло наносятся 2-3 большие капли, посредством специальной иглы равномерно распределяются. После этого мазок высушивается на свежем воздухе или в термостате и окрашивается по методу Романовского-Гимзе. Просматривается 100 полей зрения, в 1 мл можно обнаружить до 10 паразитов. Для того чтобы возбудителя увидеть под микроскопом, каплю окрашивают специальным красителем. После окраски эритроциты подвергаются гемолизу, а плазмодий – деформации. Поэтому не всегда можно распознать вид возбудителя. В данном анализе объем крови в десятки раз больше, чем при исследовании тонкого мазка. Диагностику заболевания всегда начинают с «толстой капли».   

Учет результатов

Оценка результата проводится в крестах «+». Выглядеть результат может следующим образом:

  • «+» – на 100 полей зрения насчитывается от 1 до 10 паразитов.
  • «++» – на 100 полей зрения насчитывается от 11 до 100.
  • «+++» – на 1 поле зрения насчитывается от 1 до 10.
  • «++++» – на 1 поле зрения насчитывается более 100. 

Ответ выдается после того как будут просмотрены 200-300 полей зрения.

Мазок крови

Используется как подтверждающий тест. То есть если есть подозрение на присутствие малярийного плазмодия в толстой капле, делают дополнительно мазок для дифференцировки вида возбудителя. Помимо этого, обязательно учитывают морфологические изменения красных телец.

Иммунологические методы


Диагностика иммунологическим способом (ИФА) направлена на обнаружение в сыворотке антител к паразиту. Как только он попадает в организм человека, иммунная система активизируется и в ответ на инфекцию выделяет специфические белки или антитела. При постановке реакции сыворотка пациента капается в микролунки, на дно которых нанесены антигены возбудителя. Суть заключается в том, что если у человека имеются антитела к данному паразиту, то они начинают взаимодействовать с его антигенами, по принципу «ключ-замок». Используется для выявления инфекции в неэндемических регионах.

Ответ выдается как положительный или отрицательный. При положительном титр антител составляется более 1:20, отрицательном – менее 1:20.

Полимеразно-цепная реакция

Исследование на данное заболевание с помощью ПЦР практически однозначно выявляет возбудителя, так как метод основан непосредственно на определении генетического материала в организме человека. Для исследования производится забор венозной крови. Является дорогостоящим, поэтому его целесообразней делать как подтверждающий.

Результаты учитываются как положительный и отрицательный, если речь идет о качественной реакции. При положительном ответе для точного подтверждения назначают ПЦР количественную. При количественном определении в бланке указывается, сколько копий плазмодия в 1 л крови.

Еще к иммунологическим методам для выявления плазмодия относят экспресс-тест на малярию. Используется для экстренной диагностики паразита. Причем проводиться он может самостоятельно человеком при подозрении заболевания. Основан он также на выявлении специфических белков к возбудителю. В основном такие экспресс-тесты используются туристами при посещении опасных в отношении малярии регионов.


Учет результатов оценивается как положительный при наличии на тесте двух полосок (контроля и теста) и отрицательный – одна (контрольная полоска). Если отсутствуют обе полоски, значит, нужно провести новый тест.

Для того чтобы анализы были наиболее информативными, сдаются они натощак. За час до сдачи крови на малярию не стоит курить. Накануне ужин должен быть наиболее легким. Физические нагрузки также исключаются.

Где можно сдать анализ и какова стоимость?

При подозрении на инфицирование малярийным плазмодием человеку нужно обратиться в поликлинику по месту жительству. Там врачом будет назначен анализ для обнаружения паразита. Проводится исследование бесплатно при наличии медицинского страхового полиса.

Если же человек решил сдать анализы самостоятельно, то цена будет разниться в зависимости от лаборатории. Так, в среднем анализ «толстая капля» и мазок будет составлять в пределах от 300 до 1000 рублей. Иммунологические методы – в пределах 1000 рублей. Экспресс-тесты являются самыми дорогостоящими, их стоимость начинается от 3000-5000 рублей за упаковку.

Своевременная и правильная лабораторная диагностика позволяет выявить и правильно купировать плазмодия, так как заболевание является очень тяжёлым и может привести к летальности. Для постановки диагноза следует сдать несколько анализов. В случае выявления паразита назначается индивидуальное для каждого пациента лечение, проводится оно в инфекционных отделениях.


Источник: TrutenStop.ru

Диагностика малярии основана на данных клинических проявлений, эпидемиологического расследования и лабораторных методах исследования, включающих методики выявления паразитов, их количества, видовую принадлежность и обнаружение антител в организме исследуемого. Обследованию в первую очередь подлежат пациенты из группы риска — прибывшие из эндемичных по малярии регионов, лихорадка у которых появилась в первые два года после выезда из этих регионов.

Рис. 1. Забор крови для приготовления препарата «толстая капля».

Рис. 2. Окраска и вид препаратов «толстая капля» и тонкий мазок.

Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка, позволяющая обнаружить паразитов, их количество и видовую принадлежность, является ведущим методом диагностики малярии. Она проводится при малейшем подозрении на это заболевание, независимо от температурной реакции пациента. Для определения видовой принадлежности паразитов и стадии заболевания используется тонкий мазок крови. В толстой капле локализуется больше паразитов, чем в мазке. Этот метод диагностики превосходит методику определения наличия возбудителей малярии в тонком мазке крови в 20 — 40 раз.

В периферической крови паразиты обнаруживаются через определенное время после заражения:


  • при 3-х дневной малярии — через 8 — 12 дней,
  • при тропической — от пяти с половиной дней до 12,
  • при 4-х дневной — через 15 — 21 день,
  • при малярии, подобной 3-х дневной — через 9 — 15 дней.

Паразиты в крови присутствуют как во время лихорадочного приступа, так и в межприступный период и при паразитоносительстве.

Рис. 3. Техника приготовления тонкого мазка.

Полученная при проколе пальца капля крови наносится на предварительно очищенное и сухое предметное стекло и размазывается до получения пятна 1 см в диаметре. После подсушивания на воздухе предметное стекло заливается краской Романовского—Гимзы. По истечении 40-минутной экспозиции препарат ополаскивается под проточной водой и подсушивается при комнатной температуре, установленный в вертикальное положение.

Под микроскопом исследуется не менее 100 полей зрения. Более эффективным считается исследование 2-х толстых капель в течение 2,5 минут, чем 1-й капли в течение 5-и минут. 100 полей зрения просматриваются даже в том случае, когда малярийные плазмодии выявились уже в первых полях. Это производится для того, чтобы не пропустить микст-инфекцию.

Рис. 4. Микроскопия препарата «толстая капля» и тонкого мазка является ведущим методом диагностики малярии.

Порогом обнаружения малярийных плазмодиев называется минимальная концентрация возбудителей, которую возможно выявить при микроскопировании препарата «толстая капля». При заболевании этот показатель составляет 5 паразитов в одном микролитре крови. При просмотре 100 полей зрения обследуется 0,2 мкл крови.

При наличии косвенных признаков малярии (пребывание в эндемичных зонах, гипохромная анемия, обнаружение пигмента в моноцитах) и отрицательных результатов исследования препаратов «толстая капля», исследование вновь повторяется более тщательно, и не одно, а серия, состоящая из 4 — 6 препаратов при одном уколе, либо полученных при заборе крови, который производится 4 — 6 раз в сутки в течение 2 — 3 дней.

Интенсивность паразитемии определяется знаком «+».

  • 1 (+) обозначает выявление от 1 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 5 — 50 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 2 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 10 п/зр, что соответствует 50 — 500 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 3 (+) обозначает выявление от 1 до 10 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 500 — 5000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 4 (+) обозначает выявление от 10 до 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует 5000 — 50000 плазмодиям в одном мкл крови;
  • 5 (+) обозначает выявление более 100 паразитов в 1 п/зр, что соответствует более 50000 плазмодиям в одном мкл крови.

Интенсивность паразитемии можно вычислить по количеству паразитов на 100 эритроцитов в 10 полях зрения, либо по соотношению числа паразитов и лейкоцитов в 1 мкл крови.

По интенсивности паразитемии определяется прогноз при тропической малярии. При других видах заболевания более 2% эритроцитов не поражается.

В препарате крови «толстая капля» возможно определить плазмодии малярии, находящиеся на разных стадиях развития — трофозоида, кольца, шизонта, морулы, и гаметы.

Рис. 5. Plasmodium ovale имеет округлую форму.

Рис. 6. Молодой трофозоит Plasmodium vivax в эритроците.

Рис. 7. Юные трофозоиды Plasmodium falciparum.

Рис. 8. Кольцевидные трофозоиты Plasmodium vivax.

Рис. 9. Амебовидные шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 10. Зрелые шизонты Plasmodium vivax.

Рис. 11. Женские гаметоциты возбудителей тропической малярии.

Рис. 12. Гаметоциты плазмодий тропической малярии имеют полулунную форму, плазмодии других видов заболевания — округлую.

Рис. 13. В процессе роста в цитоплазме паразитов накапливается пигмент. На фото Р. vivax.

При адекватном лечении малярии уровень паразитемии в течение суток снижается на 25% и более, а через 3 суток от начала лечения он должен составлять не более 25% от исходного. В случае обнаружения паразитов на 4-е сутки от начала лечения свидетельствует о развитии лекарственной резистентности возбудителей.

При выявлении малярии микроскопическое исследование препаратов крови проводится ежедневно. При тяжелой форме тропической малярии микроскопия проводится 2 раза в день до исчезновения возбудителей в крови и далее еженедельно до 28 дня лечения с целью оценки его эффективности и выявления резистентности к противомалярийным препаратам.

Рис. 14. Эритроциты при инфицировании P. vivax и P. ovale увеличиваются, обесцвечиваются и деформируются, в них появляется токсическая зернистость.

При инфицировании P. malariae и P. falciparum форма и размеры эритроцитов не изменяется. На фото деформированные эритроциты больного малярией (микрофотография в сканирующем микроскопе).

С помощью серодиагностики малярии возможно выявить в сыворотке крови пациента антитела и растворимые паразитарные антигены. Серологические реакции показаны к применению в случаях появления у больных лихорадки неясного генеза, гепатоспланомегалии, анемии, а также для исследования крови донора — предполагаемого источника инфекции. Серологические реакции применяются при эпидемиологическом наблюдении за лицами, проживающими в неблагополучных по малярии в прошлом территориях.

Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции. Используются так же ИФА, РИГА и др. Внедряется в практику использование реакции энзим-меченых антител (РЭМА).

В случаях очень низкой паразитемии показано применение ПЦР (полимеразной цепной реакции). Дороговизна и сложность применения данной методики не позволяет широко ее использовать.

Разработаны новые методы диагностики малярии — экспрессного микроскопического анализа препаратов крови с использованием флюоресцирующих красителей, позволяющие в течение двух минут выявить паразитов тропической малярии, количество которых более 60 в 1 мкл гемолизированой крови.

При малярии антитела появляются на 8 — 27 день паразитемии. Первыми появляются антитела IgM, затем — антитела IgG. Антитела после перенесенной малярии и успешного излечения могут длительно сохраняться в крови человека — от 0,5 до 2 и даже 20 лет.

Рис. 15. Чаще всего при диагностике малярии применяется НРИФ — непрямая реакция иммунофлуоресценции.

Малярию следует отличать от гриппа и других ОРВИ, кишечных инфекций, лептоспироза, желтой лихорадки, злокачественных форм вирусных гепатитов, тифо-паратифозных заболеваний, сепсиса, бруцеллеза, сепсиса, геморрагических лихорадок, заболеваний крови.

При коматозном состоянии малярию следует отличать от эпидемического цереброспинального менингита, уремической, печеночной и диабетической комы.

Иногда малярию следует дифференцировать с холециститом, холангитом, абсцессом печени, пиелонефритом и лимфогранулематозом.

Рис. 16. Рутинное исследование препарата «толстая капля» в регионах эндемичных по малярии.

По материалам microbak.ru

Толстая капля крови берется при подозрении наПриготовление мазка крови и толстой капли для диагностики малярии.

  1. Перед манипуляцией наденьте перчатки.
  2. Подготовьте необходимое оборудование и инструментарий:
  • Скарификатор одноразового использования.
  • 70% раствор этилового спирта.
  • Ватные шарики.
  • Предметное стекло.
  • Предметное стекло с шлифованной краем.
  • Чашку Петри.
  • Стерильный лоток.
  • Лоток для отработанного материала.
  • Сухое мыло.
  • Марлевую салфетку.

Инструментарий и материал должны быть стерильными. Предметное стекло — чистое, сухое, обезжиренное.

  • Предложите пациенту сесть удобно на стул.
  • Объясните ему суть манипуляции.
  • Выясните, какая рука у пациента нерабочая.
  • Помассируйте безымянный палец.
  • Обработайте кожу ногтевой фаланги ватным шариком, смоченным 70% этиловым спиртом по всем правилам и осушите вторым (сухим) ватным шариком.
  • Соблюдайте правила этики и деонтологии при общении с пациентом.

4. Приготовление мазка крови.

  • Сделайте прокол кожи скарификатором.
  • Первую каплю снимите сухим ватным шариком.
  • Прикоснитесь нижней поверхностью предметного стекла ко второй капле на пальце на расстоянии 1-1.5 см от края стекла.
  • Переверните стекло каплей вверх и возьмите в левую руку боковые ребра стекла. Капля располагается сверху и справа. Диаметр капли на стекле должен быть 2-3 мм.
  • Правой рукой установите стекло с шлифованной краем слева от капли под углом 45 0 с наклоном в сторону капли. Стекло с шлифованным краем должно быть немного уже предметного стекла с каплей крови. Продвигайте шлифованный край вправо до соприкосновения с каплей и подождите, пока кровь растечется по краю шлифованного стекла.
  • Не надавливая, быстрым равномерным движением проведите стеклом с шлифованной краем по предметному стеклу, пока капля не будет исчерпана. Мазок должен быть тонким и равномерным, иметь светло-розовую окраску, просвечивать, занимать ½ — ¾ стекла и заканчиваться щёточкой
  • Если крови выделилось недостаточно, предложите пациенту опустить руку вниз — выжимать каплю крови нельзя!
  • Не прикасайтесь предметным стеклом к коже!

5. Приготовление «толстой капли».

  • На предметное стекло нанесите 2-3 капли крови на небольшом расстоянии друг от друга.
  • Стеклянной палочкой или углом другого предметного стекла смешайте их. Смешивайте легко, чтобы образовалась пятно диаметром 1,5 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, иначе при высыхании образуется просто корка, которая отвалится.

6. Оформите сопроводительную документацию по известным Вам правилам и требованиям.

7. Транспортировка в лабораторию.

  • Подсушите мазок и толстую каплю на воздухе. На поверхности стекла ближе к началу мазка напишите номер, совпадающий с номером на направлении.
  • Изготовленные препараты уложите в чашку Петри и в таком виде транспортируйте в лабораторию.

8. Поместите использованное оборудование в дезинфицирующий раствор.

По материалам infection-net.ru

Достоверное установление диагноза малярии осуществляется исследованием препаратов толстой капли крови и тонкого мазка, и обнаружением в них малярийных паразитов.

Для приготовления препаратов, кровь обычно берут из 4-го пальца левой руки (меньше подвергающегося загрязнению). Концевую фалангу 4-го пальца предварительно протирают кусочком марли или ваты, пропитанной спиртом, после чего спирту дают испариться с поверхности кожи. Укол наносят копьём на глубину 2-3 мм, в зависимости от толщины кожи.

Выступившую на месте прокола первую каплю крови снимают кусочком сухой ваты, дают появиться второй капле, из которой приготовляют препарат.

Предметные стекла должны быть тщательно обезжирены. Для этого их кипятят в мыльном растворе, затем промывают в мыльном растворе. Затем промывают водопроводной и дистиллированной водой и высушивают спиртом.

Приготовление толстой капли.

В капле крови, выступившей из укола, осторожно прикасаются по­верхностью предметного отекла, после чего легким круговым движением, распределяется кровь на большой поверхности, для того, чтобы слой крови не был чересчур толстым (величина капли как 2ух-копевчная монета).

Обычно на одно стекло берут 2 капли, на некотором расстоянии друг от друга, надпись делается восковым карандашом. Капле дают высохнуть на воздухе без подогревания в горизонтальном положении.

Приготовление тонкого мазка

На поверхность предметного стекла на средней линии, ближе к од­ному концу стекла наносят маленькую, каплю крови. Стекло, (каплей вверх и направо) прижимают к горизонтальной поверхности, стола, двумя пальцами правой руки (придерживать отекло следует за ребро). Правой рукой берут шлифованное стекло (край шлифованного стекла должен быть уже предметного), которое устанавливается по середине предметного стекла перед каплей под углом 45°.

Если стекло наклонять под меньшим углом, получится слишком тонкий мазок, а если шлифованное стекло наклонять под большим градусом — мазок будет очень толстым. Затем шлифованное стекло при том же накло­не подводиться к капле до соприкосновения с ней. Капля растекается в остром углу между стеклами;

После того, как кровь распределится ровной полоской между предмет­ным стеклом и краем шлифованного, стекла, последнее легким и быстрым движением продвигается по предметному стеклу в обратном направлении, т.е. справа налево, и кровь, следуя за шлифованным стеклом, тонким слоем равномерно распределяется по поверхности предметного стекла.

После того, как кровь высохнет, у одного края мазка иглой, углом предметного стекла или простым карандашом делают надпись (фамилия, дата, номер карточки и пр). Мазки высушиваются на воздухе (избегать подогревания, не допускать мух).

Высохшие на воздухе мазки, погружают для фиксации в широкогорлую банку с фиксирующей жидкостью (метиленовый алкоголь) на 3 мин или в смеси из равных частей спирта и эфира на 20-30 минут.

По материалам infection.in.ua

При обследовании на малярию значительного числа лиц необходимо заблаговременно подготовить иглы, предметные стекла, стекла со шлифованными краями, спирт, эфир, гигроскопическую вату. Для обеспечения чистоты предметных стекол их кипятят в слабом растворе соды, затем моют с мылом в теплой воде, промывают в проточной и вытирают чистым полотенцем.

Кровь обычно берут из мякоти последней фаланги безымянного или среднего пальца левой руки. Прокол производят острыми иглами одноразового пользования. Место укола протирают спиртом, а затем ваткой, смоченной эфиром для быстрого обсушивания. Если кровь из ранки от прокола выступает плохо,

Рис. 2. Правильно изготовленный мазок крови (по Г. В. Эпштейну, 1940).

то слегка массируют палец в направлении к месту укола или просят обследуемого посгибать пальцы и сделать несколько энергичных сгибательных движений кистью. Иногда производят повторный прокол. Когда от одного больного берут несколько мазков, а выступившая из пальца кровь свертывается, ее удаляют сухой ватой. При изготовлении мазков палец повертывают проколом вверх. K выступившей капле крови прикасаются нижней поверхностью предметного стекла, отступив на 1,5—2 см от узкого края. Затем стекло перевертывают, берут в левую руку, а в правую — предметное стекло со шлифованными краями и обломанными уголками и его узким краем под углом в 45° касаются капли крови. Кровь растекается по краю шли

Рис. 1. Изготовление мазка крови.

фованного стекла, после чего быстрым движением этого стекла вперед делают мазок (рис. 1, 2). Последний должен быть тонким (эритроциты не должны налегать друг на друга) и располагаться по средней части стекла, не доходя до боковых краев и до конца стекла, так как пораженные эритроциты в значительной части группируются у конца и по краям мазков. При таком изготовлении препаратов их удобно исследовать под микроскопом.

При изготовлении толстых капель палец поворачивают проколом вниз. K выступающим каплям крови подносят предметное стекло, на которое берут 2—3 капликрови и затемиглой или углом другого предметного стекла кровь размазывают, чтобы получить на стекле овал диаметром около 1 см или полосу длиной 2—3 см. Слой крови не должен быть слишком толстым, так как в последнем случае при высыхании он превращается в корочку и легко отстает от стекла. После изготовления толстых капель их высушивают, помещая стекла на горизонтальную поверхность. Для ускорения высыхания стекол их можно помещать в термостат (30—35°). Нужно предохранять стекла от запыления, а также от мух и тараканов, которые охотно поедают влажную и подсохшую кровь.

Фиксация и окраска мазков крови. Мазки, высушенные на воздухе, фиксируют, а затем окрашивают. Для фиксации применяют метиловый спирт (фиксация 3—5 мин), этиловый 96° спирт (15 мин) или смесь Никифорова — абсолютный этиловый спирт и эфир в равных соотношениях (20 мин). Фиксатор можно наливать прямо на стекло, находящееся в горизонтальном положении, или лучше пользоваться специальными стаканчиками, в которые погружают сразу несколько препаратов. Фиксированные мазки высушивают на воздухе и окрашивают по методу Романовского — Гимза.

Готовый раствор краски разводят перед употреблением дистиллированной водой из расчета 1—2 капли на 1 мл воды и пипеткой наливают на мазки, помещенные на дно стеклянной ванночки. Продолжительность окрашивания — 30—45 мин. После окраски препарат промывают слабой струей воды и высушивают на воздухе. Ha стекле с мазком можно написать простым карандашом фамилию больного, номер и дату. Эта надпись хорошо сохраняется.

Дистиллированная вода для разведения краски должна иметь нейтральную или слабощелочнуюреакцию (pH = 7,0—7,2).

Окраска толстой капли. Толстые капли после высушивания на воздухе окрашиваются краской Романовского — Гимза без предварительной фиксации. Техника окрашивания такая же, как при окраске мазка. Длительность окрашивания — около 40—45 мин. При этом происходит выщелачивание гемоглобина из эритроцитов, и одновременно окрашиваются лейкоциты, кровяные пластинки и плазмодии. Если толстые капли сохраняли неокрашенными более недели, то их следует предварительно обработать дистиллированной водой в течение 10—15 мин, наливая воду непосредственно на препарат. После удаления со стекол дистиллированной воды, вместе с выщелоченным гемоглобином, на них наливают красящий раствор. После окраски толстой капли препараты ополаскивают водой. Лучше всего промывать препарат погружением его в баночку с водой, соблюдая осторожность, чтобы не смыть со стекла окрашенную каплю.

Хранят окрашенные препараты завернутыми в бумагу, небольшими пачками, а лучше — в специальных папках с гнездами для каждого препарата. После микроскопирования иммерсионное масло удаляют мягкой фланелевой тряпочкой. Предварительно масло можно растворять очищенным бензином. Для большей сохранности можно делать защитные покрытия препаратов раствором органического стекла в хлороформе.

Для выявления плазмодиев мазки крови рассматривают под микроскопом с объективом 90 и окуляром 7, при достаточно ярком освещении дневным или искусственным светом, отраженным плоским зеркалом микроскопа. Диафрагму открывают полностью, и осветитель поднимают до уровня столика микроскопа. Каплю иммерсионного масла наносят на тонкое место мазка. После обнаружения в препарате эритроцитов регулируют высоту осветителя и положение зеркала.

B мазке крови плазмодии обнаруживаются в эритроцитах (рис.З), причем цитоплазма паразитов окрашивается в голубой или серовато-синий цвет, а ядро — в различные оттенки красного цвета. B цитоплазме плазмодия на стадии собственно ши- зонта появляется пигмент — мелкие зернышки коричневого или темно-коричневого цвета. Для удобства изучения растущих паразитов условно подразделяют на несколько возрастных стадий.

Стадия кольца. Форма кольца образуется через 2—3 ч после внедрения в эритроцит плазмодия (мерозоита). B меро- зоите образуется вакуоль, которая отодвигает цитоплазму и ядро на периферию и паразит принимает кольцеобразную форму с узким ободком голубой цитоплазмы без пигмента и рубиново-красным ядром.

Стадия собственно шизонта. Постепенно происходит увеличение цитоплазмы, в ней появляются зернышки пигмента и плазмодий вступает в стадию собственно шизонта. Различают малые, средние и крупные шизонты.

Стадия делящегося шизонта. Ha этой стадии происходит последовательное деление ядра на 2—4—8 частей до предельного числа, свойственного каждому виду плазмодиев. Затем паразит распадается на соответствующее число мерозоитов. Последние представляют собой комочки цитоплазмы размером около 1,5 мкм, содержащие ядро. Некоторая часть мерозоитов после внедрения в эритроциты развивается в незрелые половые клетки — гаметоциты, или гамонты, в цитоплазме которых также откладывается пигмент. Они служат источником заражения комаров рода Anopheles. B организме комаров гаметоциты совершают свое дальнейшее развитие. Различают мужские и женские гаметоциты, или микрогаметоциты и макрогамето- циты. Они имеют (за исключением P. falciparum) округлую форму и напоминают крупные шизонты. У P. falciparum гаметоциты имеют форму полулуний. Для определения вида малярийных плазмодиев необходимо знать их морфологические особенности в мазках и толстых каплях.

По материалам medic.studio

Источник: medic-online.net

Толстая капля крови берется при подозрении на

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.