Сифилис, подтверждающий тест (иммуноблот) IgM — современный методов диагностики сифилиса, самый достоверный высокочувствительный метод идентификации белков.

Сифилис – инфекционное заболевание, вызываемое бледной трепонемой (Treponema pallidum), передающееся в основном половым путем, склонное к хроническому течению и поражающее большинство органов и систем организма. Сифилис характеризуется медленным прогрессирующим течением. На поздних стадиях он может приводить к тяжелым поражениям нервной системы и внутренних органов.

Клиническая картина при сифилисе
Клинические проявления сифилиса очень разнообразны и зависят от стадии заболевания. Выделяют несколько стадий сифилиса. Первичная стадия наступает примерно через 2-3 недели после заражения. На этой стадии проявляются одна или иногда несколько язв, называемых шанкром, как правило, на той части тела, которая контактировала с шанкром больного человека, например пенисом или влагалищем. Во многих случаях твердый шанкр безболезненный и остается незамеченным, особенно если он находится в прямой кишке или на шейке матки. Шанкр исчезает через 4-6 недель.


Вторая стадия заболевания начинается через 2-8 недель после возникновения твердого шанкра. Она характеризуется появлением сыпи, чаще на ладонях и подошвах. Иногда встречаются и другие симптомы, к примеру лихорадка, усталость, опухание лимфатических узлов, боль в горле и ломота в теле.

Сифилис способен протекать в скрытой форме, во время которой у инфицированного человека не проявляется никаких симптомов, но в то же время он продолжает оставаться носителем инфекции. Это может длиться годами.

Без лечения примерно у 15 % больных развиваются симптомы позднего, или третичного, сифилиса. Эта стадия иногда длится несколько лет и приводит к психическим заболеваниям, слепоте, неврологическим проблемам, болезням сердца и даже к смерти.

От сифилиса можно избавиться с помощью антибиотиков (предпочтительно применять производные пенициллина). Причем на ранней стадии заболевание лечится легче и быстрее.

При контакте человека с Treponema pallidum, его иммунная система вырабатывает антитела к бактерии. В крови могут быть обнаружены два вида таких антител: IgM и IgG.

Антитела класса IgM  при сифилисе
Антитела класса IgM вырабатываются организмом в первую очередь. Они выявляются в сыворотке крови в конце второй недели заболевания и исчезают у нелеченых больных примерно через 1-1,5 года, при лечении раннего сифилиса – через 3-6 мес., позднего – через год. Они присутствуют у большей части пациентов с первичным и вторичным сифилисом, поэтому тест на IgM может быть использован для различения давней инфекции от только приобретенной.


Специфических трепонемных антител IgM нет у лечившихся в прошлом пациентов, но их отсутствие само по себе не говорит об эффективности проведенной терапии, поскольку у большинства из тех, кто не лечился, в скрытой стадии сифилиса IgM-антитела тоже отсутствуют.

Исследование IgM антител к антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum методом иммуноблота используют в качестве дополнительного специфического трепонемного теста при необходимости углубленного исследования при неубедительных результатах скрининговых и подтверждающих тестов диагностики сифилиса.

Тест основан на методе Вестерн-блота. В ходе исследования выявляют наличие в сыворотке пациента антител класса IgG к электрофоретически разделенным и перенесенным на нитроцеллюлозную мембрану избранным антигенам возбудителя сифилиса Treponema pallidum.

Используемые антигены в методе Вестерн-блота:

47 кДа мембранный белок (TpN47) — специфичный
45 кДа (TmpA) — специфичный
22 кДа (Р 22) — неспецифичный
17 кДа мембранный белок (TpN17) — специфичный
15 кДа мембранный белок (TpN15) – специфичный

Показания
В комплексе тестов диагностики заболеваний, вызванных инфекцией Treponema pallidum (сифилис).


Подготовка
Кровь рекомендуется сдавать утром, в период с 8 до 12 часов. Взятие крови производится натощак, спустя 4-6 часов голодания. Допускается употребление воды без газа и сахара. Накануне сдачи исследования следует избегать пищевых перегрузок.

Интерпретация результатов
Формат выдачи результата исследования — качественный (описание наличия/отсутствия полос, характеризующих выявление антител к каждому из указанных антигенов; общее заключение о результате исследования в форме: положительный / отрицательный / неопределенный)

Референсные значения: отрицательный.

При общей оценке результата учитывают положение окрашенных полос (специфичность антигена) и интенсивность их окрашивания (поскольку иногда возможна неспецифическая слабая ложная реакция с отдельными антигенами):

Отрицательный результат: отсутствуют полосы специфических антигенов;
Неопределенный результат : одна четкая полоса специфического антигена: р15 кДа, р17 кДа, р45 кДа или р47 кДа;
Положительный результат: более одной четкой полосы специфических антигенов: р15 кДа, р17 кДа, р45кДа или р47 кДа.

Примечание: для установления диагноза недавней инфекции Treponema pallidum, положительный результат по IgM-антителам должен быть подтвержден положительным результатом по IgG-антителам (сероконверсией), на свежем образце крови, взятом на 3-6 недель позднее.


Специфичность исследования 98%, чувствительность 100%. Положительная предсказательная значимость 94%.

Источник: dnkom.ru

Исследование, направленное на диагностику антител к Treponema pallidum класса IgG методом иммуноблотинга в целях диагностики или подтверждения сифилиса, а также для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum.

Синонимы русские

Антитела класса IgG к возбудителю сифилиса; иммуноглобулины класса G к антигенам Тreponema pallidum.

Синонимы английские

Syphilis IgG; anti-Treponema pallidum, IgG; anti-TP IgG; antibodies to Т. pallidum, IgG; immunoblotting.

Метод исследования

Иммуноблотинг.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Сифилис является одним из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, передающимся преимущественно половым путем при непосредственном контакте с сифилитической язвой (твердым шанкром). Возможен и вертикальный путь передачи от инфицированной матери к плоду, а также через кровь и реже при контакте с контаминированными предметами. Источником инфекции является больной человек, возбудитель инфекции – Treponema pallidum (T. pallidum), семейство Spirochaetaceae, род Treponema.


Соответственно клиническому течению заболевания, классифицируют несколько стадий сифилиса: первичную, вторичную, латентную и третичную. Первичный сифилис возникает на 14-21-й день заражения и проявляется возникновением твердого шанкра в месте контакта и проникновения возбудителя. Твердый шанкр представляет собой одну или несколько безболезненных язв, исчезающих в течение 2-6 недель без лечения. Возможно также увеличение регионарных лимфатических узлов. Вторичный сифилис диагностируется на 4-8-й неделе от момента появления твердого шанкра или на 2-3-й месяц после заражения. Для него характерны следующие клинические проявления: розеолезно-папулезная сыпь преимущественно на ладонях и стопах, энантема на слизистых оболочках, слабость, лихорадка, головная боль, генерализованная лимфоаденопатия, тонзиллит, фарингит. Далее симптомы исчезают и инфекция переходит в латентную форму, возможно с возникновением рецидивов. При нелеченном заболевании развивается третичный сифилис, проявляющийся поражением нервной системы, сердечно-сосудистой системы, костно-суставного аппарата.

Клиническая лабораторная диагностика играет важную роль в диагностике сифилиса в сочетании с эпидемиологической и клинической картинами заболевания. Чаще всего используются серологические методы лабораторной диагностики, основанные на выявлении антител.


Различают нетрепонемные и трепонемные тесты. Нетрепонемные тесты направлены на выявление антител к кардиолипину, фосфолипиду, компоненту клеточной и митохондриальной мембран бактерий. Трепонемные тесты выявляют антитела, направленные конкретно против антигенов, компонентов бактерий T. pallidum. К ним относятся реакция пассивной гемагглютинации, реакция иммунофлуоресценции, метод иммуноферментного анализа и метод иммуноблотинга.

Метод иммуноблотинга используется в качестве теста второй линии для подтверждения скрининговых методов исследования или в качестве дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований. Он основан на определении антител классов IgM и IgG к молекулам-антигенам, разделенным с помощью метода электрофореза в соответствии с их молекулярной массой. Диагностическая чувствительность метода составляет 99 %, диагностическая специфичность – 100 %.

Известно несколько липопротеинов-антигенов наружной клеточной мембраны T. рallidum, которые обладают наибольшей иммуногенностью и играют важную роль в серологической диагностике сифилиса методом иммуноблотинга. К ним относятся следующие специфичные мембранные белки: Tp15 (15 кДа), Tp17 (17 кДа), Tp45 (45 кДа), Tp47 (47 кДа). Иммуноглобулины класса G к T. pallidum появляются в крови через 3-4 недели после инфицирования. Их количество постепенно увеличивается, начиная преобладать на шестой неделе заболевания над уровнем иммуноглобулинов IgM. Антитрепонемные антитела класса IgG могут сохраняться на определённом уровне в течение месяцев и лет. Уровень данных антител нарастает в зависимости от длительности заболевания.


Антитела к антигенам трепонем класса IgG играют важную роль в диагностике первичного, вторичного, третичного и латентного сифилиса. Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови. По некоторым данным, антитела класса IgGк Tp17, Tp45 и Tp47 обнаруживаются при первичном сифилисе на его более поздних стадиях. Анти-Tp45 и анти-Tp47 IgG чаще встречаются при латентной форме сифилиса. Через 24 месяца после проведенной патогенетической терапии у пациентов с первичным и вторичным сифилисом антитела класса IgGметодом иммуноблотинга не детектируются.

Для чего используется исследование?

  • Для диагностики сифилиса;
  • для подтверждения скрининговых методов исследования;
  • для дополнительной диагностики сифилиса при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
  • для дифференциальной диагностики свежеприобретенного и давнего инфицирования T. рallidum;
  • для диагностики первичного, вторичного, латентного и третичного сифилиса;
  • для профилактического обследования беременных женщин;
  • для оценки проведенной патогенетической терапии сифилиса.

Когда назначается исследование?

  • При подозрении на сифилис и при симптомах данного заболевания: наличие твердого шанкра, генитальных язв, лимфоаденопатии, слабости, лихорадки, розеолезно-папулезной сыпи преимущественно на ладонях и стопах, энантемы на слизистых оболочках;
  • при подтверждении скрининговых методов исследования и для дополнительной диагностики сифилиса, при подозрении на наличие данного заболевания, но отрицательных результатах других исследований;
  • при наличии полового партнера, больного сифилисом;
  • при ведении беременностив целях профилактического обследования беременных женщин желательно на первом приеме гинеколога, при постановке на учет в женской консультации;
  • при лечении от другого заболевания, передающегося половым путем;
  • при определении точной причины заболевания, при наличии неспецифических симптомов, схожих с признаками сифилиса;
  • если пациент был инфицирован, он должен повторить анализы на сифилис через 3, 6, 12 и 24 месяца для оценки проведенной патогенетической терапии против сифилиса.

Что означают результаты?

Референсные значения

Мембранный белок TpN47: отрицательный.                             

TmpA: отрицательный.                              

Мембранный белок TpN17: отрицательный.                  

Мембранный белок TpN15: отрицательный.

Положительный результат:

  • первичный, вторичный, третичный сифилис;
  • латентный сифилис.

Отрицательный результат:

  • отсутствие сифилиса;
  • проведение диагностики на раннем сроке, когда не сформировался иммунный ответ против возбудителя T. рallidum;
  • поскольку антитела IgG к T. pallidum могут свободно проникать через плаценту, положительный результат у младенцев не является основанием для постановки диагноза «врождённый сифилис»;
  • отсутствие антител класса IgG у младенца, родившегося от инфицированной матери, не исключает наличия врождённого заболевания, поскольку на момент исследования антитела могут ещё не сформироваться.

Что может влиять на результат?

  • Возможно получение ложноположительного результата при наличии ВИЧ-инфекции, болезни Лайма, малярии, аутоиммунных заболеваний, в частности системной красной волчанки, при атипичной пневмонии, у людей, употребляющих наркотики внутривенно, у пожилых.

Важные замечания

  • Результаты данного исследования должны интерпретироваться только комплексно, с учетом анамнеза, клинических данных, результатов лабораторного обследования.
  • Для подтверждения ранее диагностированного инфицирования T. pallidum рекомендуется определение антител класса IgG через один-два месяца после обнаружения антител класса IgM, но обязательно в свежем образце крови.
  • Отрицательный результат иммуноблотинга не исключает наличие сифилиса.
  • Если у пациента выявлено инфицирование, ему необходимо поставить в известность и своего сексуального партнера (партнершу), чтобы он (она) тоже прошел обследование и при необходимости лечение.

Также рекомендуется

[07-047] Treponema pallidum, IgG, титр

[07-048] Treponema pallidum, IgM, титр

[07-049] Treponema pallidum, антитела

[07-056] Сифилис RPR (антикардиолипиновый тест / микрореакция преципитации), титр

[07-070] Treponema pallidum, IgG в ликворе

[07-117] Сифилис РПГА (реакция пассивной гемагглютинации), титр

[07-157] anti-Treponema pallidum, IgM (иммуноблот)

Кто назначает исследование?

Дерматолог, дерматовенеролог, гинеколог, уролог, инфекционист, терапевт, врач общей практики, педиатр.

Литература

  • Sun R, Lai DH, Ren RX, Lian S, Zhang HP Treponema pallidum-specific antibody expression for the diagnosis of different stages of syphilis / Chin Med J (Engl). 2013 Jan;126(2):206-10.
  • Miranda AP, Sato NS Profile of anti-Tp47 antibodies in patients with positive serology for syphilis analized by Western Blot / Braz J Infect Dis. 2008 Apr;12(2):139-43.
  • Wang LN, Li JM Evaluation of immunoglobulin M and G Western blot and ELISA for screening antibodies to Treponema pallidumin blood donors / Sex Transm Dis. 2009 Jul;36(7):413-6.
  • Sato NS, Hirata MH, Hirata RD, Zerbini LC, Silveira EP, de Melo CS, Ueda M.Analysis of Treponema pallidum recombinant antigens for diagnosis of syphilis by western blotting technique / Rev Inst Med Trop Sao Paulo. 1999 Mar-Apr;41(2):115-8.

Источник: helix.ru

сифилис IgMВпервые встретившись с бледной трепонемой, иммунная система человека безошибочно диагностирует в ней чужеродные микроорганизмы, на которые необходимо сформировать ответную реакцию в виде антител IgG и IgM. При этом антитела сифилиса IgM вырабатываются уже через 7 дней после инфицирования, в то время как у других период формирования составляет около месяца. Важной особенностью антител IgM является их быстрое появление в организме, что позволяет при анализе крови по наличию данного антитела определить недавнее инфицирование или период повышенной активности бледных трепонем в организме. При сифилисе IgM и IgG не являются постоянными показателями и постоянно колеблются, указывая на улучшение ситуации при правильно подобранном лечении, стабильный результат — при неэффективном терапевтическом влиянии или ухудшении при отказе от лечения.

До недавнего времени основным способом определения у больного сифилиса было проведение реакции Вассермана, затем на смену начал приходить иммуноферментный анализ ИФА, который уменьшил шанс ложноположительного и ложноотрицательного результата, снизив роль человека в исследовании. Однако ИФА тоже не может похвастаться стопроцентной точностью результатов.

В плане достоверности исследований большой шаг вперёд произошёл относительно недавно и был связан с началом использования иммуноблота на сифилис. Применение иммуноблота на сифилис целесообразно применять при необходимости проведения подтверждающих тестов при положительном тесте на антитела бледной трепонемы. Иммуноблот, как система скрининга крови, является достаточно популярным методом в связи с быстрым получением результатов при минимальных финансовых вложениях, что позволяет использовать его как при повторных исследованиях, так и при необходимости определить наличие и количество антигенов IgM и IgG раздельно друг от друга.

Иммуноблот на сифилисЕщё одним преимуществом иммуноблота при сифилисе являются его специфические возможности подтвердить тот факт, что при обследовании больного в данном конкретном случае, IgM в крови был вызван бледной трепонемой, а не беременностью, ревматизмом, перекрёстной реакцией на несколько других возбудителей, гиперлипидемией, нарушением обмена веществ или аутоиммунными процессами. Таким образом, применение иммуноблота для подтверждения полученных после ИФА данных, позволяет снизить шанс ошибки при ложноположительных результатах на 25%.

Отзывы и комментарии

Оставить отзыв или комментарий

Источник: www.zppp.saharniy-diabet.com

Иммуноблот сифилис

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.